[發(fā)明專利]一種新的多肽——伴肌動蛋白18.15和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01105136.1
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364773A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——伴肌動蛋白18.15，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

伴肌動蛋白是一種異常巨大的蛋白，特異性存在于脊椎動物骨骼肌中，大約占據(jù)了那兒骨骼肌纖維蛋白總量的3％(Wang?&?Wright，1988)。序列測定顯示，伴肌動蛋白有大約35個氨基酸殘基的重復(fù)序列結(jié)構(gòu)，排列組合成7重折疊的超重復(fù)形式(Labeit?et?al.，1991)。伴肌動蛋白的這種排列方式使得細(xì)絲之間保持緊密的接觸，而且伴肌動蛋白的大小與細(xì)絲的長度是相關(guān)的(Kruger?et?al.，1991；Labeit?et?al.，1991)。

脊椎動物的細(xì)絲也排列為7重折疊重復(fù)序列，在每38.5nm長度的細(xì)絲上，存在的肌鈣蛋白、原肌球蛋白和肌動蛋白在化學(xué)計量上都遵循1∶1∶7的比率。由于伴肌動蛋白與細(xì)絲系統(tǒng)的緊密接觸，伴肌動蛋白的合成和表達(dá)方式與細(xì)絲相關(guān)(Pfuhl?et?al.，1994；Jin?&?Wang，1991；Chen?et?al.，1993)，并且伴肌動蛋白能夠結(jié)合到肌動蛋白上。

伴肌動蛋白的大小從600KDa到900KDa不同，隨著組織、物種和個體發(fā)育階段的不同而不同(Hu?et?al.，1986；Locker?&?Wild，1986)，并且存在不同的異構(gòu)形式。伴肌動蛋白的每一個重復(fù)序列上含有推定的肌動蛋白結(jié)合序列SDXXYK，并且還含有另外一些保守的序列，比如WLKGIGW結(jié)構(gòu)域的存在，解釋了肌鈣蛋白和原肌球蛋白如何周期性地結(jié)合到38.5nm的細(xì)絲重復(fù)序列上。起始的兩個超重復(fù)序列SR1/SR2沒有了WLKGIGW結(jié)構(gòu)域，與其它的超重復(fù)序列不同，它們起始于77個殘基的獨(dú)特序列，與其它蛋白沒有序列同源性。在伴肌動蛋白的C末端的900個殘基中不存在超重復(fù)序列。在伴肌動蛋白的C末端存在一個SH3區(qū)域，與酵母肌動蛋白結(jié)合蛋白ABP-1的SH3區(qū)域高度相似，它們都涉及肌動蛋白進(jìn)入到細(xì)胞骨架和非肌肉細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與伴肌動蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為伴肌動蛋白18.15。

由于如上所述伴肌動蛋白18.15蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的伴肌動蛋白18.15蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新伴肌動蛋白18.15蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——伴肌動蛋白18.15以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼伴肌動蛋白18.15的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼伴肌動蛋白18.15的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)伴肌動蛋白18.15的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——伴肌動蛋白18.15的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——伴肌動蛋白18.15的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與伴肌動蛋白18.15異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中337-834位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1038位的序列。