[發明專利]一種新的多肽——人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105133.7
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364878A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

親水分子在細菌細胞膜中的轉運由特殊的轉運系統介導：它存在于細胞膜中，由一個或多個載體蛋白組成。這些系統允許細胞結合養分時不形成大的濃度梯度而消耗代謝能量。

大腸桿菌K-12中精氨酸的轉運由2個轉運系統介導：一個是轉運精氨酸和鳥氨酸(AO系統)，另一個是轉運賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸(LAO系統)。每個系統都包含了一個特殊的外胞質結合蛋白，即AO結合蛋白和LAO結合蛋白[Celis，R.T.F.et?al.，1973?J.Bacteriol.116：619-626]。這兩個系統又包含了一個共同的內膜轉運蛋白，它可以水解ATP并且使兩個外胞質結合蛋白磷酸化。最近，有報道發現第三個精氨酸外胞質轉運系統[Wissenbach，V.，etal.，1995.Mol.Microbiol.17：675-686]。

外胞質轉運系統存在于革蘭氏陰性菌，該系統偶聯ATP結合，ATP在轉運中水解各種各樣原核生物體的溶解物包括氨基酸、糖、多肽、多糖以及無機鹽。細菌外胞質通透酶十分復雜，一種觀點認為外胞質結合蛋白作為一個受體起作用，它識別引入的底物，并且決定了系統的選擇性。蛋白-底物復合物和內膜復合物(通常右3-4個蛋白組成)相互作用[Boos，W.，and?J.M.Lucht.1996?ABCtransporters，p.1175-1209]。

大腸桿菌K-12的內在ATP酶活性和細胞對精氨酸、鳥氨酸和賴氨酸的結合程度有關。而酶活性的缺失直接導致AO轉運系統和LAO轉運系統中蛋白-底物復合物水平的減少，這顯示了ATP酶活性在這兩個轉運系統運作過程中的重要性。最近，已分離出一個對毒效應有抵抗力的刀豆氨酸突變體，它的轉運活性和兩個外胞質結合蛋白磷酸化水平都很低[Celis，R.T.F.1990.J.Biol.Chem.265：1787-1793]。

編碼轉運ATP酶的基因已被克隆并測序，該基因有一個可以編碼268個氨基酸的開放閱讀框架，分子量為29.3Kda。該酶蛋白的氨基酸序列包含了兩個短的motif，它們組成了核苷酸結合折疊。

本發明新的多肽與大腸桿菌染色體精氨酸轉運ATP酶在蛋白水平上有91％的同一性和95％的相似性，且具有相似的生物學功能和結構，因而被命名為人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98。

由于如上所述人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人染色體精氨酸轉運ATP酶45.98異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。