[發明專利]一種新的多肽——DNA聚合酶9.68和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105128.0
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364876A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——DNA聚合酶9.68，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

DNA的精確的半保留復制在物種的繁衍后代上起著關鍵的作用。有許多酶參與這個過程，如DNA聚合酶，解旋酶、拓撲異構酶等等。其中關鍵的是DNA聚合酶。DNA聚合酶可以將四種前體核苷酸按照堿基配對規律合成DNA鏈。它們都需要一條DNA單鏈作為模板，以及RNA或蛋白作為引物。DNA聚合酶只能以四種核苷酸5’-三磷酸為前體，反應通式為：Poly(核苷酸)n-3’-OH+DNTP——>Poly(核苷酸)n+1-3’-OH+2Pi，這種活性除了能使DNA鏈延伸之外，還有修復DNA和替換RNA引物的作用。

DNA聚合酶還有3’-5’外切酶的活性。這種酶活性是基于對不配對的堿基造成的單鏈的識別。因此這種酶活性是保證其聚合作用的正確性所不可缺少的，這種功能稱為校對功能。這對于DNA作為遺傳物質所必需的穩定性和極高的保真度是至關重要的。

除此以外，DNA聚合酶還有5’-3’的外切酶活性。這種活性可以使DNA雙鏈上的缺口發生平移。

現在已經發現了很多種DNA聚合酶。各種DNA聚合酶的功能不盡相同。通過對不同的DNA聚合酶的蛋白序列比較，發現有6個區域的同源性較高。其中第一個區域最為保守，包括一個四肽的結構，其中有兩個天冬氨酸殘基。這一區域的功能可能與鎂離子的結合有關。這一段保守序列是：[YA]-[GLIVMSTAC]-D-T-D-[SG]-[LIVMFTC]-x-[LIVMSTAC]

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與DNA聚合酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為DNA聚合酶9.68。

由于如上所述DNA聚合酶9.68蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的DNA聚合酶9.68蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新DNA聚合酶9.68蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——DNA聚合酶9.68以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼DNA聚合酶9.68的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼DNA聚合酶9.68的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產DNA聚合酶9.68的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——DNA聚合酶9.68的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——DNA聚合酶9.68的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與DNA聚合酶9.68異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中37-303位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1767位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制DNA聚合酶9.68蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。