[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白11和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105125.6
• 申請日: 2001-01-10
• 公開（公告）號: CN1364768A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白11，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鋅指蛋白在生物活細胞中起著重要的作用，其中最重要的是作為轉錄調節因子發揮作用[Berg?J.M.，Shi?Y.et?al.，Science，1996，271：1081-1085]。真核基因的轉錄調控對于基因的正常表達是十分重要的，通常由轉錄調控因子來完成這一調控過程。轉錄調控因子在生物體內參與決定基因在何種組織及何種發育階段開始轉錄。編碼這類蛋白的基因如發生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調節的許多基因也不能正常的進行轉錄與表達。鋅指蛋白對基因表達的調控主要通過與特定的DNA序列結合來完成，現在發現也有一些鋅指蛋白可與RNA結合以調節RNA的代謝。鋅指蛋白在生物體內的分別非常廣泛，按其結構特征又可分為各種不同的亞家族，不同亞家族的成員在生物體內協同作用，以正確地調節不同基因地表達。

鋅指蛋白為編碼鋅離子介導的核苷酸結合蛋白多基因家族中的成員。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種鋅指蛋白。C2H2型鋅指蛋白家族的成員均含有28-30個氨基酸長的保守的指重復序列：(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數不同則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結合依賴于指結構的數量，多指結構可能與復合物的結合穩定性有關，而復合物是RNA聚合酶轉錄的作用位點[JeremyM.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

鋅指蛋白家族的成員在生物體內的分布非常廣泛，按其結構特征還可分成各種亞家族。Kruppel型鋅指蛋白在生物體內即形成了獨立的亞家族，該亞家族的成員均含有鋅指蛋白家族保守的鋅指基序，且各基序間由保守的H/C連接區域連接在一起，該區域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh?R.，Aicher?W.Et?al.，Cell，1986，47：1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，該亞家族中約有三分之一的成員在其N末端還含有一由75個氨基酸組成的保守基序，并將此基序命名為KRAB(Kruppel-associated?box)結構域。該結構域為鋅指蛋白N末端與DNA結合的結構域，在進化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。該結構域被分為A、B兩個盒結構，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時含有KRAB?A-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發現，KRAB結構域為一潛在的轉錄抑制結構域，其中由45個氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉錄抑制所必須的，螺旋結構中氨基酸的替換將減弱蛋白對轉錄的抑制功能，從而導致基因轉錄表達的失調及引發各種發育及惡性紊亂相關的疾病[N.Tommerup?et?al.，Genomics，1995，27：259-264]。同時，KRAB結構域與第一個鋅指結構間也含有一保守的連接區域，該區域至少含有一個核酸定位信號，該信號與蛋白的正確定位及發揮功能有關。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人鋅指蛋白11。

由于如上所述人鋅指蛋白11蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白11蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白11蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人鋅指蛋白11以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白11的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白11的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白11的方法。