[發(fā)明專利]一種新的多肽——還原型輔酶脫氫酶Ⅰ脫氫酶13.09和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01105124.8
• 申請(qǐng)日: 2001-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN1364886A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——NADH脫氫酶13.09，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

呼吸鏈NADH脫氫酶(也稱輔酶Q氧化還原酶)，是一種寡聚酶的復(fù)合體，位于線粒體膜的內(nèi)表面上，在葉綠體和藍(lán)藻細(xì)菌中也有發(fā)現(xiàn)。整個(gè)NADH脫氫酶復(fù)合體包括25-30個(gè)多肽亞基，從NADH來的電子通過這個(gè)復(fù)合體傳遞到輔酶Q。

在哺乳動(dòng)物的脫氫酶中有一個(gè)分子量為75Kd的多肽，是酶復(fù)合體中最大的一條亞基，是酶的鐵硫(IP)位點(diǎn)的組成部分，它能結(jié)合兩個(gè)4Fe-4S簇(N-3，N-4)。另外，還發(fā)現(xiàn)產(chǎn)酸桿菌依賴NAD的氫化酶的γ-亞基、大腸桿菌NADH-輔酶Q氧化還原酶的G亞基等也有這種75Kd的亞基結(jié)構(gòu)，并且也能結(jié)合兩個(gè)4Fe-4S簇。

這種75Kd的亞基有三個(gè)保守程度較高的區(qū)域，與鐵硫蛋白的結(jié)合有關(guān)：(1)P-X(2)-C-[YWS]-X(7)-G-X-C-R-X-C；(2)C-P-X-C-[DE]-X-[GS](2)-X-C-X-L-Q；(3)R-C-[LIVM]-X-C-X-R-C-[LIVM]-X-[FY]。其中各有三個(gè)Cys殘基，其上的巰基能與含鐵硫原子的蛋白質(zhì)結(jié)合，電子最初由NADH脫氫酶上的FMN輔基所接受，然后通過鐵硫復(fù)合物傳遞給輔酶Q，鐵能以氧化狀態(tài)(Fe3+)或還原狀態(tài)(Fe2+)存在，實(shí)際上就是電子的受體或供體。

在生物體中，呼吸代謝是一個(gè)重要的代謝過程，通過電子傳遞和氧化磷酸化作用最終生成ATP，從而滿足細(xì)胞對(duì)能量的需要，而電子傳遞的第一個(gè)步驟就是通過NADH脫氫酶復(fù)合體來完成。在大腦中，某些毒素能使NADH脫氫酶產(chǎn)生缺陷，導(dǎo)致一些腦疾的產(chǎn)生，比較常見的疾病如帕金森(Parkinson)綜合癥，有些人在40歲之后就會(huì)產(chǎn)生這種癥狀，這是由于線粒體中NADH脫氫酶復(fù)合體功能的削弱；另外，低的NADH脫氫酶活性會(huì)引起亨延頓(Huntington)癥。

由于如上所述NADH脫氫酶13.09蛋白在機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的NADH脫氫酶13.09蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新NADH脫氫酶13.09蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與NADH脫氫酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為NADH脫氫酶13.09。

由于如上所述NADH脫氫酶13.09蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的NADH脫氫酶13.09蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新NADH脫氫酶13.09蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——NADH脫氫酶13.09以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼NADH脫氫酶13.09的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼NADH脫氫酶13.09的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)NADH脫氫酶13.09的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——NADH脫氫酶13.09的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——NADH脫氫酶13.09的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與NADH脫氫酶13.09異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；