[發明專利]一種新的多肽——人RNA多聚酶I－40KD亞基10.01和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105041.1
• 申請日: 2001-01-05
• 公開（公告）號: CN1363657A
• 公開（公告）日: 2002-08-14
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

DNA為RNA的酶，真核細胞中有三種RNA聚合酶，即RNA聚合酶I，RNA聚合酶II，RNA聚合酶III。RNA聚合酶I基本不受alpha-鵝膏蕈堿的抑制，在大于10^-3mo1/L時才表現出輕微的抑制作用；RNA-聚合酶II對于alpha-鵝膏蕈堿最為敏感，在10^-9-10^-8mol/L濃度下就會被抑制；RNA聚合酶III的敏感性介于I，II之間，在10^-5-10^-4時表現抑制作用。RNA聚合酶I存在于核仁中，其功能是合成5.8SrRNA，18SrRNA和28SrRNA；RNA聚合酶II存在于核質中，其功能是合成mRNA以及snRNA；RNA聚合酶III也存在于核質中，其功能是合成tRNA和5SrRNA以及轉錄A1u序列。三種主要的RNA聚合酶的分子量都在500Kda左右(14S-15S)，每種酶分子含有兩個大亞基和4-8個小亞基，每個小亞基的分子量為10.01kDa-90Kda。不同種類的基因需要不同的蛋白質輔助因子協助RNA聚合酶進行工作。此外在真核生物的線粒體中亦發現有少數RNA聚合酶，它們分子量小，活性也較低，這是與細胞器DNA的簡單性相適應的。這些RNA聚合酶都是核基因編碼，并在細胞質中合成以后在運送到細胞器中的。

RNA多聚酶I(RPI)是一種由約八至九個不同多肽亞基構成的一種酶，這些亞基的分子量從17,000道爾頓到190,000道爾頓不等。該酶位于所有真核生物細胞的核中。這種酶負責轉錄位于核中的核糖體RNA，它是一種復合物并含有許多抗原決定簇或抗原決定部位，其中有一些是與別的蛋白共享的。現又發現一種新的RNA多聚酶I亞基，因其分子量為40KD，故被稱為RNA多聚酶I-40KD亞基。該蛋白缺乏將會引起RNA多聚酶I異常，從而引發一系列與RNA多聚酶I(RPI)負責轉錄位于核中的核糖體RNA相關的疾病，例如自身免疫性疾病中的風濕性疾病等(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95(14)，8175-8180(1998))。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人RNA多聚酶I-40KD亞基的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01。

由于如上所述人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人RNA多聚酶I-40KD亞基10.01異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：