[發明專利]一種新的多肽——絲氨酸蛋白酶12.32和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105040.3
• 申請日: 2001-01-05
• 公開（公告）號: CN1363679A
• 公開（公告）日: 2002-08-14
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/57;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——絲氨酸蛋白酶12.32，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

谷物種子包含大量的絲氨酸蛋白酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑，這些抑制劑由于結構上的相似性可以形成一個家族。這個家族可能通過抑制外源的蛋白酶和淀粉酶來形成對致病菌和入侵者的防御。谷物胰蛋白酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑家族的成員是一些由約120個氨基酸殘基組成的蛋白質，其中包含10個Cys殘基構成5個二硫鍵。

這個家族在序列相似性上非常有限，主要存在于Cys殘基的數量和分布上，而理化性質(如溶解性)的不同說明它們在進化過程中可能有共同的祖先。其共同序列為C-X(4)-(SAGD)-X(4)-(SPAL)-(LF)-X(2)-C-(RH)-X-(LIVMFY)(2)-X(3，4)-C(三個Cys都參與二硫鍵的形成)。

谷物胰蛋白酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑家族中的一些可溶于NaCl的清蛋白和球蛋白，與植物過敏病人血清中的IgE結合，這個家族中的一些成員被確認為是哮喘病人的主要過敏原。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與絲氨酸蛋白酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為絲氨酸蛋白酶12.32。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與絲氨酸蛋白酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為絲氨酸蛋白酶12.32。

由于如上所述絲氨酸蛋白酶12.32蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的絲氨酸蛋白酶12.32蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新絲氨酸蛋白酶12.32蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——絲氨酸蛋白酶12.32以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼絲氨酸蛋白酶12.32的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼絲氨酸蛋白酶12.32的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產絲氨酸蛋白酶12.32的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——絲氨酸蛋白酶12.32的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——絲氨酸蛋白酶12.32的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與絲氨酸蛋白酶12.32異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1117-1455位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1566位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。