[發明專利]基因改造農作物及其加工產品的定性檢測方法和試劑盒

無效

• 申請號: 01104214.1
• 申請日: 2001-02-26
• 公開（公告）號: CN1370842A
• 公開（公告）日: 2002-09-25
• 發明（設計）人: 安利忻
• 申請（專利權）人: 安利忻
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京華一君聯專利事務所
• 代理人: 陳美章

本發明屬分子生物學檢測領域，涉及基因改造農作物及其加工產品的定性檢測方法和試劑盒。具體的是從基因改造農作物及其加工產品中提取脫氧核糖核酸(DNA)，應用多聚酶鏈式反應(PCR)和限制性內切酶(R.E.)分析技術(酶切技術)對基因改造農作物及其加工產品中的基因改造成分(genetically?modifiedorganisms，GMOs)進行定性檢測的方法和試劑盒。

1983年，世界上第一例基因改造植物問世，這標明生物技術的發展已經可以使植物遵從人類的意愿生長。1994年，美國Calgene公司研制的基因改造番茄成為世界上第一個獲準商品化生產的基因改造農作物。此后，在美國、加拿大、阿根廷和歐洲，先后有數十種基因改造農作物獲準商品化生產，這主要包括基因改造的大豆、玉米、棉花、油菜、馬鈴薯、西葫蘆、番木瓜、番茄和南瓜等。在我國，目前有五種基因改造農作物獲準商品化生產，其中三種為基因改造的番茄，另外兩種是基因改造的甜椒和棉花，還有一種基因改造的花卉——矮牽牛也獲準了商品化生產。

基因改造農作物由于具有抗蟲、抗除草劑、抗病毒以及品質改善等優點而得到大面積推廣。據統計，去年全球基因改造農作物的種植面積已達到4000萬公頃，其中超過半數為基因改造的大豆，另有近30％為基因改造的玉米。作為全球最大的基因改造農作物種植國，美國出口的食品中約60％含有基因改造成分。

1998年英國的一位科學家實驗發現，老鼠食用了基因改造的馬鈴薯后，體重減輕，器官出現異常，且免疫系統受到破壞。這在英國引起了軒然大波，盡管后來其所在的實驗室對這一結果進行了更正，但基因改造農作物及其加工產品的安全性依然引起人們的質疑：盡管目前沒有直接的證據顯示基因改造農作物及其加工產品對人類有現實的危害，但科學家們也無法證明已食用的基因改造農作物及其加工產品對人類的未來不存在危害。

因此，在西方發達國家，尤其是歐洲，人們對基因改造農作物及其加工產品表現出了強烈的抵觸情緒。政府也采取相應的措施，對基因改造農作物及其加工產品進行檢測并加以標簽，標明是否含有基因改造成份及其含量，使消費者具有知情權，可以自由選擇基因改造農作物及其加工產品。

但由于在基因改造農作物中基因改造成分在農作物的基因組中所占的比例是非常微小的，且由于產品加工過程中的高溫高壓處理對基因的破壞，以及所加工的產品中存在的抑制因子，因此對基因改造農作物及其加工產品中基因改造成分的檢測是很困難的。

在國外，科學家們正在努力研究與改進基因改造農作物及其加工產品的檢測方法，以適應種類繁多的基因改造農作物及其加工產品。而在我國，目前政府還未出臺與基因改造農作物及其加工產品相關的法規和管理標準，在基因改造農作物及其加工產品的檢測方法上還是空白。

本發明的目的旨在提供通用的對基因改造農作物及其加工產品進行定性檢測的方法及試劑盒。

本發明的基因改造農作物及其加工產品的定性檢測方法如下：

標準的檢測流程包括四個部分：基因改造農作物及其加工產品DNA的提?。焕肞CR技術擴增出基因改造成分；利用酶切技術對所擴增的基因改造成分進行鑒定；對檢測結果進行科學的通用的解釋。

為防止PCR結果對樣品的污染，DNA的提取、PCR的準備、PCR的運行及PCR結果的分析要分開不同的房間進行。

第一步、基因改造農作物及其加工產品DNA的提取

(一)待測樣品的前處理：

粉末狀的待測樣品不需處理；非粉末狀的固體待測樣品要處理成粉末狀；液態待測樣品采用冷凍干燥法干燥并研碎成粉末狀；新鮮的待測樣品清洗干凈即可。如：

對于堅硬的食品，例如黃豆、玉米粒等，采用食品加工機或研缽進行研磨，成為粉末狀；

對于固體的非堅硬食品，例如餅干、薯片等，采用研缽或鑷子將其搗碎，成為粉末狀；

對于固體的粉末狀的食品，例如豆粉、面粉等，可直接用于分析；

對于半固體的食品，例如番茄醬、腐乳等，采用冷凍干燥法，并研碎成為粉末；

對于液體的食品，例如豆奶、啤酒等，采用冷凍干燥法，并研碎成為粉末；

對于新鮮的食品，例如新鮮的馬鈴薯、番茄等，可清洗干凈后，直接用于分析。

在進行前處理的時候，每處理完一個樣品，要及時清理器具，采用洗滌液、酒精及高溫滅菌等方式，防止食品的交叉污染。

(二)提取待測樣品的DNA，方法一如下：