[發(fā)明專利]微生物易感性的快速測定

無效

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• 申請日: 2001-01-20
• 公開（公告）號: CN1333374A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉實(shí)
• 申請（專利權(quán)）人: 劉勝;劉實(shí)
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種快速測定微生物對各種物質(zhì)易感性的方法。

自1920年以來，已有多種方法被提出用于檢查微生物對諸如抗微生物素/抗生素等物質(zhì)的易感性。但是，只有兩種方法被廣泛接受而成為臨床實(shí)踐的標(biāo)準(zhǔn)方法。這兩種方法是稀釋易感性試驗(yàn)和紙片擴(kuò)散試驗(yàn)(見L.M.?Prescott等編著1996年Wm.C.Brown出版社在美國波斯頓出版的《微生物學(xué)》第三版660-662頁)。

在稀釋易感性試驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)數(shù)目的待測微生物被接種于含有一系列濃度抗微生物素/抗生素的肉湯培養(yǎng)管中，然后檢查這些被接種管的微生物群體生長狀態(tài)。在所有不顯示微生物生長的管子中，抗微生物素/抗生素濃度最低的那一管即代表最小抑制濃度。微生物生長狀況是通過測定培養(yǎng)物的混濁度而確定。這種測定通常需要16到20小時方可顯示有顯著意義的變化。

在紙片擴(kuò)散法中，待測微生物被接種于瓊脂平板上，然后在其上放置一個含有抗微生物素/抗生素的圓紙片。抗微生物素/抗生素的擴(kuò)散形成一個抗微生物素/抗生素的濃度梯度：最高濃度位于紙片中，最低濃度位于擴(kuò)散的前緣。在含有有效抗微生物素/抗生素的地方，微生物不能生長而顯示出一個環(huán)繞紙片的透明圈。在此圈之外，由于抗微生物素/抗生素濃度低于最小抑制濃度，微生物生長而形成菌苔。由于形成肉眼可見的菌苔需要相當(dāng)長的時間，微生物的易感性通常在培養(yǎng)16-18小時后才可報(bào)告。

在紙片擴(kuò)散法中，位于透明圈邊緣的抗微生物素/抗生素濃度不是由紙片擴(kuò)散法本身得出，而是需要另外進(jìn)行稀釋易感性試驗(yàn)，以得出透明圈與最小抑制濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線和表格，然后查圖或查表得出該濃度。由于透明圈大小受抗微生物素/抗生素的最初濃度、溶解性和擴(kuò)散速度、以及瓊脂平板的狀況等因素影響，如要準(zhǔn)確地從紙片擴(kuò)散法估計(jì)最小抑制濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)表格應(yīng)以同批抗微生物素/抗生素紙片和同批瓊脂平板為基準(zhǔn)。因此，盡管紙片擴(kuò)散法比稀釋易感性試驗(yàn)容易實(shí)施，但它卻依賴于后一方法才能獲得完整的結(jié)果。

所有常規(guī)的微生物易感性試驗(yàn)都要求將樣本在瓊脂平板上進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)以觀察微生物生長和鑒定微生物，然后進(jìn)行次級培養(yǎng)富集微生物群體以獲得足夠的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)目的微生物用于接種稀釋易感性實(shí)驗(yàn)的肉湯管或紙片擴(kuò)散試驗(yàn)的瓊脂平板。加上這些準(zhǔn)備工作所需的時間，完整的微生物易感性測定通常要兩到三天才能完成。常規(guī)微生物易感性測定法使用陪氏培養(yǎng)皿和試管進(jìn)行培養(yǎng)。因此，需用大量的培養(yǎng)基和大量的待測物質(zhì)。另外，培養(yǎng)和貯存這些器件也要較大的儀器和空間。

近來，一些改良的方法已被提出用于微生物易感性的快速測定。例如：

美國專利5789173號，微生物易感性快速測定方法。

美國專利5770373號，用針對核糖體RNA前體的寡核甘酸探針對耐藥性分枝桿菌進(jìn)行快速和敏感的檢測。

美國專利5738989號，使用核糖體核酸雜交測定微生物對抗微生物物質(zhì)的敏感性。

美國專利5738988號，用核糖體探針雜交檢查樣本中未知的微生物和抗微生物的物質(zhì)。

美國專利5712095號，使用針對核糖體RNA前體的寡核甘酸探針對有耐藥性的分枝桿菌進(jìn)行快速和敏感的檢測。

美國專利5948633號，測定化合物對連續(xù)培養(yǎng)之微生物的作用。

美國專利5789173號所述的快速微生物易感性試驗(yàn)依賴于對短期培養(yǎng)的樣本進(jìn)行DNA放大以達(dá)到早期判定抗生素效率的目的。該法不需要對樣本進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)。通過對放大后的DNA的進(jìn)行檢測而不是對肉湯管混濁度或平板抑菌圈的進(jìn)行檢測，此法縮短了報(bào)告最小抑制濃度(MIC)所需的時間。據(jù)稱此法全過程可短至12小時。

美國專利5770373號描述一種專門用于檢測耐藥性分枝桿菌的快速和敏感的方法。通過使用特別設(shè)計(jì)的能與分枝桿菌核糖體RNA前體(pre-RNA)結(jié)合的寡核甘酸探針，此法可檢查出分枝桿菌的存在與生長狀況。關(guān)于分枝桿菌Pre-RNA的檢查已于早期的一項(xiàng)發(fā)明(美國專利5712095)中介紹。

美國專利5738989號描述一種使用核糖體核酸雜交法確定微生物對抗微生物物質(zhì)的敏感性測定的方法，該法需要制備僅對某些選定的微生物的核糖體核酸菜一特別亞基的序列能結(jié)合的探針。

美國專利5948633號描述一種檢測化合物對連續(xù)培養(yǎng)的微生物的作用的方法。在該法中，營養(yǎng)和測試化合物被分別以控制的流速加入生長室內(nèi)，使得測試化合物的濃度逐漸增高。測試化合物對待測微生物的作用通過對流出生長室(恒化器)的細(xì)胞密度的測定而得知。當(dāng)微生物細(xì)胞密度不增加時，化合物的濃度即為對該待測微生物的最小抑制濃度。