[發(fā)明專利]一種瘦蛋白基因的修飾方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 01100464.9
• 申請日: 2001-01-15
• 公開（公告）號: CN1366051A
• 公開（公告）日: 2002-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李寧;昔奮攻;吳常信
• 申請（專利權(quán)）人: 李寧
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/67;C12N15/62;C12N15/70;C07K14/435;A61K38/17;A61P3/04;A23K1/16
• 代理公司: 北京海虹嘉誠專利代理有限公司
• 代理人: 張濤

本發(fā)明所屬的技術(shù)領(lǐng)域?qū)儆谏锛夹g(shù)領(lǐng)域。

本發(fā)明的技術(shù)背景：

肥胖是指由于脂肪的過度積累造成體重超出正常范圍，它經(jīng)常與疾病相聯(lián)系，如高血壓、II型糖尿病和不育癥等。肥胖不僅影響人類健康，并且已成為嚴重影響社會發(fā)展的障礙。在1988-1994年間，美國約有20％的婦女和25％男性是肥胖者，歐洲35-65歲間的成人中有50％以上屬于肥胖者；據(jù)英國有關(guān)部門統(tǒng)計，英國的肥胖者由1980年的男性8％和女性6％增至1997的男性20％和女性17％；發(fā)展中國家在過去的20年中肥胖者的比例也在迅速增加。在美國和歐洲，每年減肥藥物和食品的銷售額均上千億美元。雖然現(xiàn)階段我國的人口肥胖問題并不嚴重，但隨著物質(zhì)生活水平的提高，肥胖趨勢也日趨嚴重，例如，我國現(xiàn)在每年的減肥藥物和食品的銷售額都在百億元以上。

在1994年以前的40年中，研究者通過對機體生長調(diào)節(jié)的大量研究，提出了許多關(guān)于體重調(diào)節(jié)的假說。1953年，Kennedy(Kennedy?G.C.，Proc.R.Soc.Lond.B.，140，579-592(1953))提出了抑制攝食信號的產(chǎn)生是由于脂肪的儲存并作用于大腦的結(jié)果；當代謝和散發(fā)熱量誘導(dǎo)體重下降后，抑制攝食信號水平被嚴格控制，而產(chǎn)生了攝食量的增加，直到能量空缺被補齊。1994年，Stellar(Stellar?E.，The?physiology?of?motivation.Psychol.Rev.，61，5(1954))通過下丘腦的VMH核和LHA核損毀實驗提出下丘腦通過VMH核作為飽食中樞，LHA作為攝食中樞來對動物的攝食行為進行雙重調(diào)控，從而達到調(diào)節(jié)體重的目的。VMH產(chǎn)生的信號可以通過自主神經(jīng)系統(tǒng)的交感和副交感神經(jīng)向下傳遞到肝臟、胰腺和脂肪等組織調(diào)節(jié)胰島素的分泌和脂肪代謝。另外一些研究表明(Travers?S.等，Annu.Rev.Neurosci.，10，595-632(1987))，小鼠飽食中樞在后腦腦干的NTS區(qū)域，因為飽感產(chǎn)生于攝食過程，個體在攝食中，食物對胃腸的機械和化學(xué)感受器刺激而產(chǎn)生的信號在此區(qū)域集中并綜合，產(chǎn)生飽感。但后腦與前腦的切斷術(shù)證明，在沒有下丘腦調(diào)節(jié)的情況下，攝食調(diào)節(jié)是可以進行的，因此認為NTS區(qū)域是飽食中樞。這兩種觀點都各有依據(jù)，另外，NTS與VMH和LHA間存在更復(fù)雜的聯(lián)系，這一點需進行進一步研究證明。1973年，Gibbs和Smith(Gibbs?J.等，J.Comp.Physiol.Psychol.，84，488-495(1973))提出飽食因子，認為其產(chǎn)生于個體進食中，包括胃腸道分泌的一些肽類物質(zhì)，將信號傳遞給大腦抑制進食，導(dǎo)致攝食結(jié)束。這些假說主要集中在飲食調(diào)節(jié)、激素和神經(jīng)內(nèi)分泌水平上，直到1994年，美國Rockefeller大學(xué)J.M.Friedman博士領(lǐng)導(dǎo)的研究小組利用位置克隆技術(shù)克隆了鼠ob基因和人的同源物，確定了ob基因的產(chǎn)物---瘦蛋白(Leptin)是由脂肪組織產(chǎn)生的反映脂肪組成的信號因子，成熟肽分子量為16kD，其不僅可以維持和促進能量消耗，還可以降低攝食量(Zhang，Y.等，Nature，373，425-432(1994))。從而揭開研究肥胖形成機理尤其是分子遺傳基礎(chǔ)的新篇章。

目前已確定，Leptin是脂肪細胞分泌的，它通過內(nèi)分泌作用分解脂肪，維持和促進能量消耗(Zhang，Y.等，Nature，373，425-432(1994))。另外，它在個體繁育、造血和糖代謝方面有一定作用。鑒于Leptin對體重調(diào)節(jié)的重要作用和其在個體繁育、造血和糖代謝方面有一定作用，本發(fā)明人對已發(fā)表的人ob基因和豬ob基因進行了修飾表達，并對相應(yīng)的表達條件進行了選擇研究。

Leptin為非糖蛋白。其中，人Leptin在大腸桿菌中的表達已進行了許多研究，其表達量最高可達50％左右(Jeong?KJ和Lee?SY.，Appl?EnvironMicrobiol.，1999，65(7)：3027-32)。但是，豬Leptin在大腸桿菌中的表達尚未見報道。