[發明專利]L－泛內酯水解酶和一種D－泛內酯的制備方法

無效

• 申請號: 00814937.2
• 申請日: 2000-10-20
• 公開（公告）號: CN1384880A
• 公開（公告）日: 2002-12-11
• 發明（設計）人: M·凱塞勒;B·豪爾;T·弗里德里希;R·瑪特斯
• 申請（專利權）人: 巴斯福股份公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N1/21;C12P17/04;C12P41/00;//;C12R119)
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生,林柏楠

1.一段分離的、編碼一段具有L-泛內酯水解酶活力多肽的核酸序列，選自：

a)具有SEQ?ID?NO：1所示序列的核酸序列，

b)由于遺傳密碼的簡并，導致從序列SEQ?ID?NO：1中衍生的核酸

??序列，

c)其編碼的多肽具有SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列的SEQ?ID?NO：

??1所示核酸序列的衍生物，并且該衍生物在不明顯損失該多肽酶

??活性的前提下，在氨基酸水平上至少應有50％的同源性，

d)(a)到(c)中所提序列的功能等同物。

2.由權利要求1所述核酸序列編碼的氨基酸序列。

3.由SEQ?ID?NO：1所示序列編碼的，權利要求2所述的氨基酸序列。

4.含有權利要求1所述核酸序列的核酸構建體，其中該核酸序列與一或多個調節信號相連。

5.含有權利要求1所述核酸序列或權利要求4所述核酸構建體的載體。

6.含有至少一個權利要求1所述核酸序列、至少一個權利要求4所述核酸構建體或權利要求5所述載體的微生物。

7.權利要求6所述的微生物，它為革蘭氏陰性菌。

8.權利要求6或7所述的微生物，它為來自α-蛋白細菌、β-蛋白細菌或γ-蛋白細菌族的細菌。

9.權利要求6到8中任何一個所述的微生物，它為來自腸桿菌科、假單胞菌科或根瘤菌科的細菌。

10.權利要求6到9中任何一個所述的微生物，它為來自土壤桿菌屬、假單胞菌屬、伯克霍爾德氏菌屬、沙門氏菌屬或埃希氏菌屬的細菌。

11.具有下列性質的L-泛內酯水解酶：

a)將L-泛內酯轉化成相應的酸，

b)pH穩定性：L-泛內酯水解酶在pH?4-10范圍內穩定，

c)最適pH：7.2到7.6，

d)最適溫度：大約70℃到75℃，

e)EDTA不抑制其活性。

12.一種制備D-泛內酯的方法，它包括下列反應步驟：

a)在權利要求11所述的L-泛內酯水解酶或在具有權利要求2所述氨基酸序列的L-泛內酯水解酶或在權利要求6所述微生物存在時，將外消旋泛內酯轉化成D-泛內酯和L-泛解酸，

b)除去D-泛內酯。

13.權利要求12所述的方法，其中，在步驟(b)得到的L-泛解酸被外消旋化并被回收至步驟(a)。

14.權利要求12或13所述的方法，其中，外消旋泛內酯的轉化在有固定化的、權利要求11所述的L-泛內酯水解酶或固定化的、具有權利要求2所述氨基酸序列的L-泛內酯水解酶存在時進行。

15.權利要求12或13所述的方法，其中，外消旋泛內酯的轉化在有生長的、休眠的或破碎的如權利要求6所述微生物存在時進行。

16.權利要求12或15所述的方法，其中，微生物為固定化的。

17.如權利要求12到16中任何一項所述的方法，其中，該方法在pH4至12之間的水反應溶液中進行。

18.如權利要求12到17中任何一項所述的方法，其中，該方法在0℃到95℃之間進行。

19.權利要求12或13所述的方法，其中，D-泛內酯通過萃取被去除。

20.如權利要求12到18中任何一項所述的方法，其中，D-泛內酯具有至少90％ee的光學純度。