[發(fā)明專利]溶瘤腺病毒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00813593.2
• 申請(qǐng)日: 2000-11-14
• 公開（公告）號(hào): CN1382218A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·約翰遜;A·法塔伊;T·漢密斯頓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昂尼克斯藥物公司
• 主分類號(hào): C12N15/86
• 分類號(hào): C12N15/86;A61K48/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 唐偉杰

???????????????????????發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腺病毒載體，以及用于生成和使用這些載體的方法。更具體的說，本發(fā)明涉及在E1A和/或E4區(qū)啟動(dòng)子中包含突變和替代從而賦予顯著的腫瘤細(xì)胞特異性溶瘤活性的改良型腺病毒載體。

?????????????????????????背景

早在本世紀(jì)早期，病毒就已經(jīng)被用于治療癌癥。這種方法包括兩個(gè)部分：第一，分離或生成在贅生性細(xì)胞中選擇性復(fù)制并選擇性殺死腫瘤細(xì)胞同時(shí)不傷害正常細(xì)胞的溶瘤病毒。研究人員最初使用野生型病毒，這種方法獲得了一些但有限的成功。在溶解腫瘤并減緩腫瘤生長且很少或不損傷正常組織的同時(shí)，疾病進(jìn)程卻沒有顯著改變。參閱Smith等人，癌癥(Cancer)9：1211-1218，1956；W.A.Cassel等人，癌癥(Cancer)19：863-868，1965；H.E.Webb等人，柳葉刀(Lancet)1：1206-1209，1966；S.Kenney和J.Pagano，國家癌癥協(xié)會(huì)會(huì)刊(J.Natl.Cancer?Inst.)86(16)：1185，1994。

最近，由于與野生型病毒應(yīng)用的有限功效有關(guān)的疾病復(fù)發(fā)，研究人員已經(jīng)開始采取能夠以高劑量投遞、能夠在贅生性細(xì)胞而非正常細(xì)胞中復(fù)制的重組病毒。這些病毒自身是有效的溶瘤劑，而且經(jīng)改造能夠攜帶并表達(dá)增強(qiáng)病毒抗贅生物活性的轉(zhuǎn)基因。這類病毒的范例是病毒基因組E1B區(qū)突變的腺病毒。參閱美國專利號(hào)5,677,178；J.R.Bischoff、D.H.Kim、A.Williams、C.Heise、S.Horn、M.Muna、L.Ng、J.A.Nye、A.Sampson-Johannes、A.Fattaey、和F.McCormick，科學(xué)(Science)274：373-376，1996。

重要的是將含或不含用于治療癌癥的轉(zhuǎn)基因的復(fù)制型病毒與研究人員使用的第二種方法即表達(dá)轉(zhuǎn)基因的非復(fù)制型病毒區(qū)分開來。在第二種方法中，病毒只作為投遞直接或間接負(fù)責(zé)殺死贅生性細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因的載體。這種方法已經(jīng)成為并將繼續(xù)作為使用病毒治療癌癥的主要方法。然而，它取得的成功有限，而且顯得不如復(fù)制型病毒有效。不過，已經(jīng)將外源基因插入E1區(qū)(參閱McGrory，病毒學(xué)(Virology)163：614-617，1988)、E3區(qū)(參閱Hanke，病毒學(xué)(Virology)177：437-444，1990；Bett，病毒學(xué)雜志(J.Virol.)67：5911-5921，1993)，或者插入刪除E1區(qū)載體的E3區(qū)。

如上所述，為了避免正常組織受到高劑量病毒療法的損傷，優(yōu)選的是，病毒具有促進(jìn)其在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制由此增強(qiáng)溶瘤活性但對(duì)正常細(xì)胞基本上無害的突變。這種方法利用了下面的觀察結(jié)果：控制正常細(xì)胞生長的許多細(xì)胞生長調(diào)控機(jī)制在贅生性細(xì)胞中被滅活或喪失，而且病毒滅活這些相同生長控制機(jī)制以促進(jìn)病毒復(fù)制。因而，滅活特定正常細(xì)胞生長控制機(jī)制的病毒基因刪除或滅活將防止病毒在正常細(xì)胞中復(fù)制，但是這些病毒將在缺乏特定生長控制機(jī)制的贅生性細(xì)胞中復(fù)制并殺死這些腫瘤細(xì)胞。

例如，正常分裂中細(xì)胞瞬時(shí)缺乏在某些贅生性細(xì)胞中缺乏的并與其無限生長有關(guān)的生長控制機(jī)制，成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤腫瘤抑制基因(RB)。成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤腫瘤抑制基因基因功能的喪失與多種類型腫瘤的病因?qū)W有關(guān)。這種腫瘤抑制基因的產(chǎn)物，稱為pRB或p105的105kD多肽，是細(xì)胞周期調(diào)控蛋白。pRB多肽通過將細(xì)胞滯留在細(xì)胞周期的G1期來抑制細(xì)胞增殖。pRB蛋白質(zhì)是幾種DNA病毒癌蛋白的主要靶，包括腺病毒E1a、SV40大T抗原、和乳頭瘤病毒E7。這些病毒蛋白質(zhì)結(jié)合并滅活pRB，而滅活pRB的功能在促進(jìn)病毒復(fù)制中是重要的。pRB蛋白質(zhì)與涉及腺病毒E2基因和幾種細(xì)胞基因表達(dá)的E2F轉(zhuǎn)錄因子相互作用，并抑制這種轉(zhuǎn)錄因子的活性(Bagchi等人，細(xì)胞(Cell)65：1063，1991；Bandara等人，自然(Nature)351：494，1991；Chellappan等人，美國國家科學(xué)院進(jìn)展(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)89：4549，1992)。