[發明專利]轉錄水平沉默的植物基因

無效

• 申請號: 00812946.0
• 申請日: 2000-09-14
• 公開（公告）號: CN1376203A
• 公開（公告）日: 2002-10-23
• 發明（設計）人: A·斯泰默;O·米特爾斯坦謝德;J·帕茲科斯基
• 申請（專利權）人: 辛根塔參與股份公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C07K14/415;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 唐偉杰

1.具有式R_A-R_B-R_C的核酸，其中：

-R_A，R_B和R_C代表由獨立地選自G、A、T、C組或G、A、U、C組的核苷酸殘基組成的組分序列，其中：

G是鳥苷酸，

A是腺苷酸，

T是胸腺苷酸，

U是尿苷酸，

C是胞苷酸；

-R_A和R_C獨立地由0～6000個核苷酸殘基組成；

-R_B由至少50個核苷酸殘基組成；并且

-組分序列R_B與以下比對組分序列至少有80％的同一性：SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQID?NO：6、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：27。

2.權利要求1的核酸，其中R_B由至少100個核苷酸殘基組成，并與以下比對組分序列有至少85％的同一性：SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?IDNO：7、SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：27。

3.權利要求1的核酸，其中R_B的核酸序列是SEQ?ID?NO：7、SEQ?IDNO：9或SEQ?ID?NO：27中給出的序列。

4.權利要求1的核酸，其中R_A或R_C包含長度至少為50個核苷酸殘基、與以下比對組分序列具有至少90％同一性的一個或多個額外組分序列：SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：27。

5.權利要求1至4中任何一項的核酸，其包含編碼含有至少200個氨基酸長、與SEQ?ID?NO：10比對組分序列至少85％相同的組分序列的蛋白質的開放閱讀框。

6.選擇相比于野生型植株而言轉錄水平基因沉默受損的植株的方法，該方法包括：

a)分別制備一系列植物的RNA；

b)用權利要求1所述的核酸探測這些RNA制品；并且

c)鑒定其RNA與所述核酸雜交的植株。

7.權利要求6的方法，其中步驟b)和c)包括用特異于SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：27的寡核苷酸引物，對所述RNA進行逆轉錄，并隨后對所產生的DNA進行擴增。

8.代表細胞或植株中另一基因保持沉默所必需基因的至少部分的DNA的生產方法，包括：

(a)通過在其基因組中隨機插入一段已知序列的DNA標簽，對野生型細胞或者植株進行誘變；

(b)鑒定所述細胞或植株的突變體，該突變體表達在野生型細胞或植株中不表達的RNA；

(c)對DNA標簽插入位點周圍或附近的基因組DNA片段進行克隆；

(d)用(c)步得到的基因組DNA片段或其一部分對野生型細胞或植株的基因組文庫進行篩選；

(e)鑒定包含有受到DNA標簽插入影響的基因的至少一部分的克隆；并且

(f)用重組DNA技術對在(e)步得到的克隆進一步處理。

9.權利要求8的方法，其中植物通過T-DNA、Ac/Ds或EN/I插入，或其它物理或化學誘變法誘變。

10.權利要求8的方法，其中對表達不在野生型細胞或植株中表達之RNA的突變體的鑒定，是通過對所述的RNA進行逆轉錄，再對產生的DNA用特異于它的寡核苷酸引物擴增(RT-PCR)而進行的。

11.根據權利要求10的方法，其中突變體文庫用RT-PCR分析。