[發(fā)明專利]用脫氧核酶治療炎癥性或惡性疾病

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00811262.2
• 申請日: 2000-08-04
• 公開（公告）號: CN1382211A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬爾科姆·洛弗爾·亨德爾;利·闊克·夸因·源;戴維·G·埃金斯;慕瑞·約翰·凱恩斯
• 申請（專利權(quán)）人: 強生研究有限公司;尤尼瑟馳有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;A61K38/43;C12Q1/68
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及靶向于編碼轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的亞基的mRNA分子的脫氧核酶(DNAzyme)。本發(fā)明還涉及包含這些脫氧核酶的組合物和包括給予這些脫氧核酶的治療方法。

發(fā)明背景

關(guān)節(jié)炎

最近，關(guān)節(jié)炎研究大量集中在發(fā)現(xiàn)炎癥的個別介體的抑制劑，特別是TNFα和IL-1β的抑制劑。這一途徑潛在的不當(dāng)之處是存在大量起炎癥介體作用的基因產(chǎn)物，并且炎癥介體的任何一種，或甚至幾種的抑制可能不足以完全控制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)病程。用非甾體抗炎藥抑制環(huán)加氧酶不能控制關(guān)節(jié)腐蝕可以說明這種情況。TNFα或IL-1β的抑制比環(huán)加氧酶抑制具有更深切的優(yōu)點，但是，許多炎癥介體的抑制可能是完全控制RA所需要的。轉(zhuǎn)錄因子與基因啟動子區(qū)結(jié)合以在mRNA合成水平誘導(dǎo)它們的表達，其能夠同時控制許多炎癥介體。轉(zhuǎn)錄因子是大量炎癥介體的表達所必需的，所以是RA治療中適當(dāng)?shù)陌小?/p>

在關(guān)節(jié)炎中的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB

可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，通常是p50和RelA(p56)的雜二聚體，在炎癥基因表達的調(diào)節(jié)中特別重要。NF-κB的誘導(dǎo)物包括TNFα、IL-1β、PDGF、氧化應(yīng)激、病毒產(chǎn)物和細菌細胞壁產(chǎn)物如LPS。依次，NF-κB可以激活細胞因子(TNFα、IL-1β、IL-6、IL-8)、粘附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-選擇蛋白)和酶(iNOS、COx-2、cPLA₂)的轉(zhuǎn)錄，活化細胞因子、粘附分子和酶形成炎癥過程的主要已知組成部分。NF-κB轉(zhuǎn)錄活性極大地受到細胞質(zhì)中NF-κB被蛋白質(zhì)族，IκB螯合的控制。在細胞的刺激下，IκB降解，導(dǎo)致NF-κB移位到核中，在核中NF-κB與許多基因的啟動子序列，如上面列出的那些結(jié)合。因為NF-κB定位于RA中的滑膜細胞的核中(Handel等，1995a)，并且NF-κB的誘導(dǎo)物和靶的列表與RA中的炎癥介體的目錄非常匹配，人RA中的活化NF-κB的重要作用是很可能的。這得到了動物模型的支持，其中在大鼠中NF-κB誘導(dǎo)(decoy)、IκB阻抑物有效地減少鏈球菌細胞壁誘導(dǎo)的和降植烷誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(Miagkov等，1998)。

另一種轉(zhuǎn)錄因子，AP-1在炎癥性關(guān)節(jié)炎的病理中可能也是重要的。AP-1定位于成纖維細胞樣CD14陰性B型滑膜襯細胞核(Handel等，1995a)。AP-1對金屬蛋白酶的表達是重要的，特別是對膠原酶和基質(zhì)溶素，它們很可能是RA中骨和軟骨腐蝕的成因(Brinckerhoff，1991)。

應(yīng)該注意到，雖然NF-κB也存在于成纖維細胞的亞群中，但它主要是在巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)的。相反，AP-1幾乎僅在滑膜襯成纖維細胞中發(fā)現(xiàn)(Handel等，1995a；Kinne等，1994)。有人提出存在階層系統(tǒng)(hierarchy)，由此巨噬細胞(A型滑膜細胞)中的NF-κB活性是鄰近成纖維細胞(B型滑膜細胞)中AP-1激活的原因。這一假說的基礎(chǔ)起始于觀察到TNFα的表達主要限于滑膜襯巨噬細胞(Chu等，1991)，假定這種限制是通過NF-κB的活性發(fā)生的。TNFα已經(jīng)放置于細胞因子的階層系統(tǒng)的起始，特別是因為TNFα控制滑膜細胞中IL-1β和IL-6表達，反過來卻不是。另外，滑膜成纖維細胞的金屬蛋白酶表達已經(jīng)清楚地表明是由TNFα和IL-1β誘導(dǎo)的。正如上面提到的，金屬蛋白酶表達是AP-1依賴性的，或者換句話說，成纖維細胞中AP-1依賴性基因的表達是由于細胞因子的作用，細胞因子即TNFα，它在巨噬細胞中是NF-κB依賴性的。巨噬細胞中NF-κB活性是最為重要的假說進一步得到RA中關(guān)節(jié)腐蝕與滑膜中巨噬細胞的密切相關(guān)這一觀察的支持。

癌癥中的NF-κB和編程性細胞死亡

NF-κB在細胞增殖和編程性細胞死亡的基本過程中起作用。在一些癌癥細胞中，化學(xué)治療和放射治療可以誘導(dǎo)NF-κB活性。NF-κB的激活保護細胞免于編程性細胞死亡，所以導(dǎo)致對這些治療的抗性。通過反義寡核苷酸或通過NF-κB的抑制劑I-κBa的表達對NF-κB的抑制已經(jīng)發(fā)現(xiàn)引起成人T細胞白血病(Kitajima，1992)和人乳腺癌(Higgins，1993；Cai，1997)腫瘤消退。更近的報道表明，抑制NF-κB在纖維肉瘤模型中通過增加編程性細胞死亡克服對化學(xué)治療的抗性(Wang，1999)。在各種癌癥和白血病中，抑制NF-κB將導(dǎo)致消退和/或化學(xué)敏感性的假說是合理的。

NF-κB抑制劑