[發明專利]適于檢測德克氏酵母屬和酒香酵母屬的培養基

無效

• 申請號: 00810102.7
• 申請日: 2000-05-31
• 公開（公告）號: CN1367843A
• 公開（公告）日: 2002-09-04
• 發明（設計）人: V·B·洛雷羅;M·貢薩爾維斯;N·羅德里格斯
• 申請（專利權）人: 農業高等專科學院;STABVIDA生物科學調查與服務股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 吳磊

發明目的

本發明涉及到一種培養基，在其制劑中含有乙醇和p-香豆酸，它適于食品和飲料污染物德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的鑒別檢測和計數。采用所述的適于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母鑒別檢測的方法也是本發明的目的。所述培養基在酵母鑒定法(gallery)中的用途還是本發明的一項目的。

本發明的目的在于提供食品和飲料工業一種培養基和使用所述培養基的方法，通過這種培養基和其中生長的菌落的顏色變化，以及特征的酚樣香味的產生，能夠分離、鑒別地檢測和計數德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母。

背景技術

目前在許多不同的聚集處(例如，飲料、食品、自然底物)的酵母微生物區系的研究和鑒定一般包括首先菌株分離階段和在普通酵母培養基的純化階段，接著是其次的鑒定階段，它采用經典的分類學方法或分子生物學基礎的技術。德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的緩慢生長令其在常規使用的培養基中的分離極其困難，由于這些酵母已經被與它們共存的更快生長的酵母掩蓋(overtake)。這樣的事實令它們的檢測和計數，以及它們以后在食品和飲料中的鑒定更困難，這種鑒定一般通過采用極慢的、工作深入的和專業技能要求高的經典技術或者通過采用包括昂貴的反應物、在市場上并不經常迅速獲得的分子探針或引物和熟練操作者的分子生物學技術完成。

毫無疑問地確信這些酵母包含于酒-″horse?sweat″-尤其是在櫟樹桶陳化的那些之中的嚴重感覺缺陷的產品內是可能的。(Chatonnet等人，1992，J.Sc.Food?Agric.，60.165-178)。其后，它們在酒中的檢測和計數是必需的，隨之出現發展適于那樣的檢測和計數的快速方法的需要。本領域參考書目公開了適于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母檢測和計數的方法，它基于這些種的放線菌酮耐藥性和它們的酸化能力(Chatonnet等人，1992，J.Sc.Food?Agric.，60，165-178；Fugelsang，K.等人，1993.Ed.Barry?H.Gump.ACS?Symposium?series?536.American?ChemicalSociety，華盛頓.Cap.7，110-119；Alguacil，M.等人，1998.Aliment.Equipos?Tecnol，10，81-85).然而，這些已公開的培養基并不完全令人滿意，由于它們沒有充分的防止快速生長菌種生長的選擇性，而且不是完全鑒別的。

因此，對于適于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的簡易和快速鑒定的培養基和方法存在真正的和實際的需要，即提供食品和飲料工業一種適于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的快速分離、鑒別的檢測和計數方法。

發明介紹

令人驚奇地發現采用含有乙醇和p-香豆酸的培養基適于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母生長，與其它酵母相比，在培養5至12天之后，這些酵母以特征的和唯一形式產生4-乙苯酚和乙酸。此外，通常與德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母共存、更快生長從而防礙它們的檢測的其它種的酵母，被選擇性地抑制。

按照本發明，研發一種培養基，它對于德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母是部分選擇性地和完全鑒別的，它基于通過其特征性香味的4-乙苯酚檢測，和借助于適當的酸-堿顏色變化的醋酸檢測，乙苯酚和醋酸由在含乙醇和p-香豆酸的培養基中生長的那些酵母產生。

因此，本發明涉及到適于食品和飲料污染物德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的鑒別檢測和計數的培養基。所述的培養基包括營養基，作為非發酵能源和抑制其它酵母種的乙醇，作為由所述酵母種產生的芳香化合物促進底物的p-香豆酸，變色點位于酸性范圍的酸-堿指示劑(特別是溴甲酚綠)，抑制幾個種酵母生長的抗生素(特別是放線菌酮)，以及瓊脂，當這種培養基以固體形式使用時。

在一項實施方案中，按照本發明的培養基中營養基是″YeastNitrogen?Base″(酵母氮基)并且酸-堿指示劑是溴甲酚綠。

在另一項實施方案中，按照本發明的培養基進一步含有細菌生長抑制劑，特別是氯霉素和/或土霉素，它對于包括種群的混合細菌之內德克氏酵母屬和酒香酵母屬酵母的檢測是特別地有效的。

本發明目的培養基，當其為液體形式時，通過滅菌過濾制備，接著分散至足夠的試管中。預計培養基是固體形式時，瓊脂溶于軟化水中，接著在高壓滅菌器中滅菌；滅菌之后冷卻至大約50℃，無菌條件下加入以前已經濾過滅菌過的其它的成分。在滅菌之前對兩種培養基進行pH調節，pH值取決于使用的酸-堿指示劑。勻化混合物，并傾入陪替氏培養皿，固化之后培養基備用。