[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)錄激活抑制蛋白

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00809228.1
• 申請日: 2000-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN1364172A
• 公開（公告）日: 2002-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秋山徹;中村勉;多胡賢一
• 申請（專利權(quán)）人: 協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C12N15/12;C12N1/21;C12N5/10;C12P21/02;A61K38/17;A61K48/00;C07K16/18;A61K39/395;G01N33/50;G01N33/53;G01N33/574;G01N33/577;//C12P21/08
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所
• 代理人: 巫肖南,黃益芬

????????????????????????技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)，其具有與β-連環(huán)蛋白結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄激活的活性，所述轉(zhuǎn)錄激活是由β-連環(huán)蛋白與屬于TCF/Lef家族的蛋白質(zhì)形成復(fù)合物而誘導(dǎo)的，本發(fā)明還涉及編碼該蛋白質(zhì)的DNA，識(shí)別該蛋白質(zhì)的抗體，含有所述蛋白質(zhì)或DNA的治療劑，和含有所述抗體的診斷試劑。

????????????????????????背景技術(shù)

本文使用下列縮寫：

AD：轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域

ADH：醇脫氫酶

APC：結(jié)腸腺癌(adenomatous?poliposis?coli)

BD：DNA-結(jié)合結(jié)構(gòu)域

β-連環(huán)蛋白/TCF-4：β-連環(huán)蛋白和TCF-4的復(fù)合物

DCC：結(jié)直腸癌中的缺失

dhfr：二氫葉酸還原酶

DLG：Drosophila?Discs?Large

DMSO：二甲亞砜

EDTA：乙二胺四乙酸

ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

EST：表達(dá)序列標(biāo)簽

FAP：家族性結(jié)腸腺癌

FCS：胎牛血清

FITC：異硫氰酸熒光素

GST：谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶

GST/ICAT：GST和ICAT的融合蛋白

GSK-3β：糖原合酶激酶-3β

ICAT：β-連環(huán)蛋白和TCF的抑制劑

IPTG：異丙基硫代半乳糖苷

KLH：匙孔血藍(lán)蛋白(Keyhole?limpet?hemocyanin)

Lef：淋巴細(xì)胞增強(qiáng)子-結(jié)合因子

LTR：長末端重復(fù)序列

MBS：間-馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺

MEM：極限必需培養(yǎng)基

PCR：聚合酶鏈反應(yīng)

PEG：聚乙二醇

RITC：異硫氰酸羅丹明

SDS：十二烷基硫酸鈉

SDS-PAGE：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

TCF：T細(xì)胞因子

Tris：三(羥甲基)氨基甲烷

X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

已分離到作為FAP致病基因的APC基因(Kinzler和Vogelstein，細(xì)胞，87，159(1996))。然而，據(jù)報(bào)道，不僅可在FAP中觀察到APC基因異常，也可在70至80％的偶發(fā)性結(jié)腸癌病例中觀察到APC基因異常。據(jù)認(rèn)為，結(jié)腸癌的發(fā)生是由很多基因的連續(xù)突變引起的，所述基因包括K-ras，p53，DCC等，也包括APC。與其它基因相比，APC基因中的突變發(fā)生得最早，因此，據(jù)信APC基因的異常是結(jié)腸癌發(fā)生的主要事件。

為了闡明與APC基因異常相關(guān)的癌癥發(fā)生機(jī)制，必須測定基因產(chǎn)物APC蛋白的功能。據(jù)報(bào)道，大小約為300kDa的APC蛋白與細(xì)胞中的β-連環(huán)蛋白，糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)以及DLG結(jié)合(Rubinfeld等，科學(xué)，262，1731(1993)；Su等，科學(xué)，262，1734(1993)；Rubinfeld等，科學(xué)，272，1023(1996)；Matsumine等，科學(xué)，272，1020(1996))。關(guān)于APC蛋白的功能，據(jù)報(bào)道，當(dāng)在具有APC基因突變的結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480中表達(dá)野生型APC蛋白時(shí)，β-連環(huán)蛋白的水平快速降低(Munemitsu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，3046(1995))。含有7個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)的中心區(qū)域是APC蛋白的功能所必需的，該區(qū)域與很多結(jié)腸癌病例中存在有突變的區(qū)域一致。另外，據(jù)報(bào)道在這些結(jié)腸癌細(xì)胞中，β-連環(huán)蛋白水平升高(Munemitsu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92，3046(1995)；Rubinfeld等，癌癥研究，57，4624(1997))。