[發(fā)明專利]用作TNF－α信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制物的TRAF2變體

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00808279.0
• 申請(qǐng)日: 2000-04-06
• 公開（公告）號(hào): CN1353754A
• 公開（公告）日: 2002-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·H·希爾福斯三世;M·F·帕格諾尼;Y·D·伊瓦申科;K·郭;K·L·克拉克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿溫蒂斯藥物制品公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;A61K38/16;A61K38/17;A61K48/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 唐偉杰

發(fā)明領(lǐng)域

腫瘤壞死因子α(TNFα)是多種細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答中的細(xì)胞間遞質(zhì)，包括活化的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞。由TNFα激發(fā)的應(yīng)答通過它與兩個(gè)獨(dú)特的TNFα細(xì)胞表面受體：TNFαR1和TNFαR2之間的相互作用啟動(dòng)。TNFα與這些細(xì)胞表面受體結(jié)合并激發(fā)轉(zhuǎn)錄因子的活化，例如，核因子κB(NFκB)，它們調(diào)節(jié)多種免疫和炎性應(yīng)答基因的表達(dá)。

憑借TNFα的結(jié)合，TNFα受體通過它們的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域與多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)翻譯蛋白質(zhì)相互作用。已知與TNFα受體相關(guān)的一組細(xì)胞內(nèi)信號(hào)翻譯蛋白質(zhì)是腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子，即已知為受體蛋白的“TRAF”家族。TRAF家族由許多具有共同結(jié)構(gòu)特征的同源蛋白質(zhì)組成，它們與TNFα受體蛋白相聯(lián)系并從中傳導(dǎo)信號(hào)。TRAF蛋白缺少酶促活性基元，而似乎顯示接頭蛋白質(zhì)的功能，它可將載體偶聯(lián)至下游信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)中。該家族的一個(gè)成員，TRAF2，與許多TNFα受體家族蛋白質(zhì)相聯(lián)系，包括TNFαR1、TNFαR2、CD40和CD30。對(duì)于TRAF2，已鑒定至少有8個(gè)細(xì)胞內(nèi)分子與其直接結(jié)合。TRAF2已顯示出對(duì)于TNFα介導(dǎo)的各種轉(zhuǎn)錄因子的活化是關(guān)鍵的，尤其是對(duì)NFκB和C-jun?N-末端激酶(JNK/SAPK)，這些轉(zhuǎn)錄因子依次負(fù)責(zé)免疫/炎性應(yīng)答的表達(dá)。

有多種疾病與受TNFα結(jié)合控制的所調(diào)節(jié)途徑有關(guān)系。在某些情況下，TNFα結(jié)合激發(fā)了最終導(dǎo)致疾病的炎性應(yīng)答。因此，需要開發(fā)預(yù)防與TNFα受體結(jié)合相關(guān)的疾病的方法。尤其期望找到預(yù)防炎性應(yīng)答激活的方法，所述應(yīng)答原本會(huì)被TNFα的激活所引發(fā)。為了治療和預(yù)防與TNFα結(jié)合相關(guān)的疾病，本發(fā)明提供了以TRAF2為基礎(chǔ)并能抑制TNFα信號(hào)傳導(dǎo)途徑的多肽。

???????????????????已報(bào)道的進(jìn)展

TRAF蛋白的一般結(jié)構(gòu)已被描述并在圖1(a)中進(jìn)行了大致說明，該圖顯示了圖表形式的全長TRAF2(TRAF-FL)。這些蛋白質(zhì)具有帶鋅環(huán)指基元的N-末端區(qū)，隨后是一列類鋅指結(jié)構(gòu)。鋅指區(qū)之后是由兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)域組成的保守(TRAF)結(jié)構(gòu)域：N-末端結(jié)構(gòu)域和C-末端結(jié)構(gòu)域。C-末端結(jié)構(gòu)域涉及受體的結(jié)合和TRAF的同源及異源寡聚化作用，它是各種其它信號(hào)傳導(dǎo)蛋白質(zhì)的停泊位點(diǎn)。

TRAF2遵循上述TRAF蛋白質(zhì)的一般結(jié)構(gòu)。已有許多研究試圖將TRAF2蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的亞結(jié)構(gòu)域與該蛋白的功能相聯(lián)系起來。

Takeuchi等對(duì)TRAF2進(jìn)行了廣泛的突變分析(Takeuchi等，生物化學(xué)雜志J.Biol.Chem.，271(33)19935-42(1996))。這些研究顯示TRAF2由介導(dǎo)獨(dú)特活性的模塊化結(jié)構(gòu)域組成。作者確定TRAF2的N-末端環(huán)指及兩個(gè)相鄰的鋅指是NFκB激活所需要的，而TRAF結(jié)構(gòu)域中的獨(dú)特的TRAF-N和TRAF-C亞結(jié)構(gòu)域看來是獨(dú)立介導(dǎo)自身結(jié)合及其與TRAF1的相互作用。

Song等(美國國家科學(xué)院院報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，94，9792-9796(1997))隨后的研究顯示TNFα誘導(dǎo)的NFκB及c-jun?N-末端激酶(JNK/SAPK)活化需要TRAF2。作者顯示，TRAF2是兩激酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致NFκB和JNK激活的分支點(diǎn)。此報(bào)告支持了TRAF2及TRAF家族其它成員作為接頭蛋白質(zhì)的功能性模型，其中具有起始平行下游應(yīng)答之附加信號(hào)蛋白質(zhì)的停泊位點(diǎn)。

Min等(免疫學(xué)雜志(J.Immunology)，159，3508-3518(1997))用轉(zhuǎn)染/過表達(dá)的策略來分析TRAF蛋白質(zhì)的作用。先前已顯示含TRAF結(jié)構(gòu)域但缺少氨基末端殘基1-80的TRAF2可抑制TNFα誘導(dǎo)NFκB的活化。作者證實(shí)此TRAF2變體還阻斷TNFα對(duì)JNK的激活作用。

Brink等(生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，273，7，4129-4134(1998))描述了一種TRAF2的剪接變體，他們稱之為“TRAF2A”。TRAF2A的cDNA除了具有附加的21bp序列外，其余部分與TRAF2相同，此21bp序列編碼的7個(gè)氨基酸插入TRAF2A環(huán)指結(jié)構(gòu)域中。作者發(fā)現(xiàn)TRAF2AmRNA的表達(dá)以組織特異的方式被調(diào)節(jié)，且TRAF2A蛋白能與TNFαR2的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域結(jié)合。他們還發(fā)現(xiàn)，與TRAF2相反，當(dāng)TRAF2A在293細(xì)胞中過表達(dá)時(shí)，它不能刺激NFκB活性，而是充當(dāng)TNFαR2依賴型NFκB活化的主要抑制物。