[發明專利]來自珊瑚組織的色素蛋白

無效

• 申請號: 00805766.4
• 申請日: 2000-02-02
• 公開（公告）號: CN1345330A
• 公開（公告）日: 2002-04-17
• 發明（設計）人: O·赫格－古爾德博格;S·多維
• 申請（專利權）人: 悉尼大學
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04;C07K14/435;C12N15/12;C12N15/74;A61K7/42;A61P43/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 張廣育,姜建成

發明領域：

本發明涉及來自珊瑚的色素蛋白，特別是編碼所述色素蛋白的多核苷酸分子及其用途。

發明背景：

業已從天然來源中分離并鑒定了多種有色分子和/或熒光分子。其例子包括apoaequorin，一種從發光水母——多管水母中分離的單鏈多肽，從Renilla(又被稱為海腎)中分離的綠色熒光蛋白(GFP)和renilla熒光素酶，Renilla屬于被稱為珊瑚蟲的一類腔腸動物。

本申請從各種珊瑚組織中純化了色素蛋白(PPCT)，并克隆了編碼具有特殊的、和有用特征的PPCT的基因。

發明內容：

在第一方面，本發明提供了一種分離的多核苷酸分子，它包括編碼從在受到入射光線輻射時能發射熒光的珊瑚組織中分離的色素蛋白(PPCT)的核苷酸序列，其中，所述入射光線的最大吸收在320-600納米(優選550-580納米)范圍內，而最大熒光發射在350-700納米(優選400-650納米)范圍內。

所述分離的多核苷酸分子優選包括編碼具有以下N-末端氨基酸序列的蛋白的核苷酸序列：SVIAK(SEQ?ID?NO：1)。

更優選的是，所述分離的多核苷酸分子優選包括編碼具有以下N-末端氨基酸序列的蛋白的核苷酸序列：SVIAKQMTYKVYMSGTV(SEQ?ID?NO：2)。

更優選的是，所述分離的多核苷酸分子優選包括編碼具有相當于下文所示SEQ?ID?NO：3或4的序列的氨基酸序列的蛋白的核苷酸序列。

更優選的是，所述分離的多核苷酸分子包括一種核苷酸序列，它與下文所示SEQ?ID?NO：5或SEQ?ID?NO：6的序列的相同性為至少80％，更優選至少90％，最優選至少95％。

最優選的是，所述分離的多核苷酸分子包括一個基本上相當于下文所示SEQ?ID?NO：5或SEQ?ID?NO：6的序列的核苷酸序列。

在本發明的一種優選實施方案中，所述分離的多核苷酸分子包括能在高嚴格條件下與SEQ?ID?NO：5或6所示序列雜交的核苷酸序列，并且其長度小于5000個核苷酸，盡管它的長度可以小于1000甚至500個核苷酸。不過，優選的是，本發明的雜交多核苷酸分子的長度至少為18個核苷酸。

能在高嚴格條件下與SEQ?ID?NO：5或6所示序列雜交的本發明的多核苷酸分子包括編碼為本申請人所了解的PPCT異構型的多核苷酸分子，其長度為221個氨基酸。所述多核苷酸分子包括一個終止密碼子，它位于SEQ?ID?NO：5或6所示編碼Cys221的密碼子的位置上。

在第二方面，本發明提供了一種包括以下N-末端氨基酸序列的蛋白：SVIAK(SEQ?ID?NO：1)，所述蛋白基本為純化形式。

優選的是，所述基本上純化的蛋白包括以下N-末端氨基酸序列SVIAKQMTYKVYMSGTV(SEQ?ID?NO：2)。

更優選的是，所述蛋白包括基本上相當于下文所示SEQ?ID?NO：3或4的序列的氨基酸序列。

本發明的蛋白(PPCT)具有以下特征：

i)水溶性蛋白(長度為231-235個氨基酸)；

ii)λ_max的吸收光譜在340-600納米范圍內；

iii)光誘導的；

iv)大多為二聚體形式，盡管有時也可以是三聚體；

v)與綠色熒光蛋白(GFP)有大約22％的氨基酸相同性和大約56％的氨基酸相似性；

vi)PPCT上的氨基酸序列“QYG”取代了GFP載色團位置上的“SYG”；

vii)估計PI＝9.5；和

viii)在高溫(例如35℃)下合成，并且在更高溫度(例如40℃)下穩定。

在560-600納米下具有最大吸收值的PPCTs在所有條件下都具有弱熒光(在560-600納米下激發，在600-650納米下發射)。其他PPCTs在不同波長下吸收/激發和發射。基本上有四種類型：根據熒光行為可將PPCTs分成以下類型：在300-360納米、420-465納米、480-490納米和550-600納米波長下激發時能發出熒光。所述分子在400-550納米、480-490納米、500-505納米和610-630納米波長下分別具有最大的發射(參見表4)。

PPCT可以從以下珊瑚科的組織中純化：Pocilloporidae、Acroporidae、Poritidae、Faviidae、Merulinidae、Fungiidae。