[發(fā)明專利]將核苷酸從固相載體上切下無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 00805759.1 | 申請(qǐng)日： | 2000-03-28 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN1345328A | 公開（公告）日： | 2002-04-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 安德魯·戈?duì)柶澆?/a> | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 安德魯·戈?duì)柶澆?/a> |
| 主分類號(hào)： | C07H21/00 | 分類號(hào)： | C07H21/00 |
| 代理公司： | 上海專利商標(biāo)事務(wù)所 | 代理人： | 陳劍華 |
| 地址： | 法國(guó)弗斯*** | 國(guó)省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 核苷酸 載體 切下 | ||
1.一種將核酸分子從它結(jié)合的固相載體上切割下來的方法，其中，在所述核酸分子的預(yù)定位點(diǎn)上摻入非常規(guī)核苷酸，所述方法包括在所述非常規(guī)核苷酸位點(diǎn)選擇性地切斷所述核酸分子。
2.一種可逆地固定核酸分子的方法，其特征在于，所述方法包括：
(a)在所述核酸分子的預(yù)定位點(diǎn)摻入非常規(guī)核苷酸；
(b)將所述核酸分子結(jié)合到固相載體上；步驟(a)和(b)可按順序或同時(shí)進(jìn)行；接著
(c)在所述非常規(guī)核苷酸位點(diǎn)選擇性地切斷所述核酸分子。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述核酸分子是包含核酸組分和其他非核酸組分的嵌合分子。
4.如權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述非常規(guī)核苷酸是尿嘧啶、次黃嘌呤、核糖核苷酸、N-7甲基鳥嘌呤、8-氧化鳥嘌呤、脫氧尿苷、脫氧肌苷、脫氧5，6-二羥基硫胺、5′，6′-二羥素、脫氧3′-甲基腺苷或3′-甲基腺苷。
5.如權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)所述的方法，其中，通過酶作用實(shí)現(xiàn)所述選擇性切斷。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中，使用DNA糖基化酶實(shí)現(xiàn)所述選擇性切斷。
7.如權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸分子包括DNA，所述非常規(guī)核苷酸是尿嘧啶(U)，以及使用尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)實(shí)現(xiàn)所述選擇性切斷。
8.如權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將所述非常規(guī)核苷酸作為接頭序列的一部分摻入所述核酸分子中。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述接頭序列是引物。
10.如權(quán)利要求1到9中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸分子是引物延伸產(chǎn)物。
11.如權(quán)利要求1到10中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述載體是磁珠。
12.如權(quán)利要求8到11中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述接頭序列含有固定到固相載體上的手段。
13.如權(quán)利要求10到12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸分子是cDNA，或者是體外延伸反應(yīng)或測(cè)序反應(yīng)的產(chǎn)物。
14.如權(quán)利要求8、11或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸分子包含偶聯(lián)于蛋白質(zhì)、酶底物、受體伙伴、抗原或半抗原，或者它們的片段的接頭序列，或者偶聯(lián)于親和結(jié)合基團(tuán)或報(bào)道基團(tuán)上的接頭序列。
15.一種結(jié)合到固相載體上隨后被切斷下來的結(jié)構(gòu)的制備方法，所述方法包括將一核苷酸接頭序列摻入所述結(jié)構(gòu)中，該接頭序列包含在預(yù)定位點(diǎn)上能選擇性切斷的非常規(guī)核苷酸。
16.一種嵌合分子，所述分子包括含有在預(yù)定位點(diǎn)可選擇性切斷的非常規(guī)核苷酸的核苷酸接頭序列，該序列偶聯(lián)于一官能團(tuán)上。
17.如權(quán)利要求16所述的嵌合分子，其中，所述官能團(tuán)是親和結(jié)合基團(tuán)或報(bào)道基團(tuán)。
18.如權(quán)利要求15所述的方法，或者如權(quán)利要求16或17所述的嵌合分子，其中，所述接頭序列是固定的，或者含有固定到固相載體上的手段。
19.如權(quán)利要求16到18中任一項(xiàng)所述的嵌合分子，其中，所述親和結(jié)合基團(tuán)是抗體或其片段或其衍生物，或者是半抗原。
20.一種從樣品中分離靶細(xì)胞的方法，所述方法包括使用權(quán)利要求16到19中任一項(xiàng)所述的嵌合分子使靶細(xì)胞結(jié)合到固相載體上，其中，所述官能團(tuán)是能特異性地與所述細(xì)胞結(jié)合的親和結(jié)合基團(tuán)。
21.如權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)所述的方法，其中，使多個(gè)不同核酸分子或嵌合分子附著或結(jié)合到固相載體上，每個(gè)所述不同核酸分子摻入了不同的非常規(guī)核苷酸。
22.用于權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)所述方法的試劑盒，所述試劑盒包括：
(a)將非常規(guī)核苷酸導(dǎo)入核酸分子的手段；和
(b)進(jìn)行所述非常規(guī)核苷酸選擇性切斷的手段。
23.摻入了非常規(guī)核苷酸的聚核苷酸或寡核苷酸，所述聚核苷酸或寡核苷酸固定在固相載體上，或者含有固定化的手段。
24.如權(quán)利要求23所述的聚核苷酸或寡核苷酸，其中，所述聚核苷酸或寡核苷酸是聚dU或寡dU。
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