[發(fā)明專利]用于檢測(cè)膜來(lái)源的caspase活性和其調(diào)節(jié)劑的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00805719.2
• 申請(qǐng)日: 2000-03-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1345378A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·C·福里茨;J·F·克雷博斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伊鄧藥品公司
• 主分類號(hào): C12Q1/37
• 分類號(hào): C12Q1/37
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 唐偉杰

1.用于鑒定膜來(lái)源的caspase活性的方法，包括在足以允許caspase活性形成的條件和時(shí)間下孵育含有重膜或核膜的膜組分，以及隨后檢測(cè)caspase的活性。

2.權(quán)利要求1的方法，其中caspase活性通過(guò)測(cè)量caspase底物的轉(zhuǎn)化來(lái)檢測(cè)。

3.權(quán)利要求2的方法，其中底物的轉(zhuǎn)化通過(guò)時(shí)程分析測(cè)量。

4.權(quán)利要求2的方法，其中底物的轉(zhuǎn)化通過(guò)終點(diǎn)分析測(cè)量。

5.權(quán)利要求2的方法，其中底物的轉(zhuǎn)化通過(guò)選自熒光光譜學(xué)、質(zhì)譜分析、HPLC、比色法、熒光自顯影、放射顯影、凝膠電泳、層析和N端肽測(cè)序的方法來(lái)檢測(cè)。

6.權(quán)利要求1的方法，其中caspase活性通過(guò)確定caspase的加工來(lái)檢測(cè)，所述加工導(dǎo)致產(chǎn)生大caspase亞基和小caspase亞基。

7.權(quán)利要求6的方法，其中大、小caspase亞基通過(guò)選自熒光光譜學(xué)、質(zhì)譜分析、HPLC、比色法、熒光自顯影、放射顯影、凝膠電泳、層析和N端肽測(cè)序的方法檢測(cè)。

8.權(quán)利要求1-7之任意一項(xiàng)的方法，其中該膜組分來(lái)源于非凋亡細(xì)胞。

9.權(quán)利要求1-7之任意一項(xiàng)的方法，其中該膜組分來(lái)源于經(jīng)細(xì)胞凋亡刺激物處理過(guò)的細(xì)胞。

10.權(quán)利要求9的方法，其中該細(xì)胞凋亡刺激物選自：生長(zhǎng)因子剝奪、星形孢菌素、抗fas抗體、紫外輻射、γ輻射和腫瘤壞死因子。

11.用于鑒定膜來(lái)源caspase活性的抑制劑的方法，包括在至少一種候選抑制劑存在和不存在時(shí)，將膜組分與caspase底物接觸；然后比較caspase底物轉(zhuǎn)化的水平，并由此鑒定膜來(lái)源的caspase活性的抑制劑。

12.權(quán)利要求11的方法，其中該caspase底物含有可被caspase切割的位點(diǎn)，且該底物選自蛋白質(zhì)、多肽、寡肽、肽模擬物和肽。

13.權(quán)利要求12的方法，其中該底物含有肽DEVD。

14.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分是從未經(jīng)刺激的選自下組的組織培養(yǎng)細(xì)胞制備的：697類淋巴母細(xì)胞、E15初生大腦皮層細(xì)胞、MN9D細(xì)胞、Jurkat?T細(xì)胞和FL5.12細(xì)胞。

15.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分含有選自重膜和核膜的膜。

16.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分含有重膜。

17.權(quán)利要求11的方法，其中底物轉(zhuǎn)化通過(guò)時(shí)程分析來(lái)檢測(cè)。

18.權(quán)利要求11的方法，其中底物轉(zhuǎn)化通過(guò)終點(diǎn)分析來(lái)檢測(cè)。

19.權(quán)利要求17或18的方法，其中通過(guò)選自熒光光譜學(xué)、質(zhì)譜分析、HPLC、比色法、熒光自顯影、放射顯影、凝膠電泳、層析和N端肽測(cè)序的方法檢測(cè)caspase底物的轉(zhuǎn)化。

20.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分來(lái)源于表達(dá)促細(xì)胞凋亡多肽的細(xì)胞。

21.權(quán)利要求11的方法，還包括在加入所述caspase底物之前或同時(shí)將該膜組分與caspase的激活物一起孵育。

22.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分來(lái)源于非凋亡細(xì)胞。

23.權(quán)利要求11的方法，其中該膜組分來(lái)源于經(jīng)細(xì)胞凋亡刺激物處理過(guò)的細(xì)胞。

24.權(quán)利要求23的方法，其中該細(xì)胞凋亡刺激物選自：生長(zhǎng)因子剝奪、星形孢菌素、抗fas抗體、紫外輻射、γ輻射和腫瘤壞死因子。

25.用于鑒定膜來(lái)源caspase活性的增強(qiáng)劑的方法，包括在至少一種候選增強(qiáng)劑存在和不存在時(shí)用caspase底物接觸膜組分，然后比較caspase底物轉(zhuǎn)化的水平，由此鑒定膜來(lái)源的caspase活性的增強(qiáng)劑。

26.權(quán)利要求25的方法，其中該caspase底物含有可被caspase切割的位點(diǎn)，且該底物選自蛋白質(zhì)、多肽、寡肽、肽模擬物和肽。

27.權(quán)利要求26的方法，其中該底物含有肽DEVD。