[發(fā)明專(zhuān)利]BAFF,其封閉劑以及它們?cè)贐細(xì)胞應(yīng)答的調(diào)節(jié)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00805487.8
• 申請(qǐng)日: 2000-01-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1347326A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杰弗里·布朗寧;克里斯廷·安布羅斯;費(fèi)比尼·麥凱;朱格·肖普;帕斯卡爾·施耐德
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 比奧根公司;阿波泰克股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/17
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/17;A61K39/395;A61K48/00;A61P9/00;A61P9/12;A61P13/12;A61P35/00;A61P31/18;A61P37/02
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所
• 代理人: 巫肖南

?????????????????發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及配體BAFF及其封閉劑刺激或抑制B-細(xì)胞和免疫球蛋白表達(dá)的用途，所述BAFF是屬于腫瘤壞死因子家族的B-細(xì)胞活化因子。該蛋白質(zhì)及其受體具有抗癌和/或免疫調(diào)節(jié)作用，并且可用于治療免疫抑制疾病，如HIV。特別是，該配體及其封閉劑可對(duì)高血壓及其相關(guān)疾病的發(fā)展起作用。另外，可在基因治療中使用被該配體的基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞來(lái)治療涉及B-細(xì)胞的腫瘤，自身免疫病或先天性遺傳病。封閉劑，例如特異于該配體或其受體的重組變體或抗體也具有免疫調(diào)節(jié)作用。希望將BAFF用作免疫抑制疾病的B-細(xì)胞刺激劑，包括例如用于經(jīng)受器官移植(即骨髓移植)以及從癌癥治療中恢復(fù)的患者以刺激B-細(xì)胞的產(chǎn)生。也希望將BAFF用作佐劑和/或共刺激劑以將B細(xì)胞水平升高或恢復(fù)至大致正常的水平。

?????????????????發(fā)明背景

與腫瘤壞死因子(TNF)-相關(guān)的細(xì)胞因子是宿主防御和免疫調(diào)節(jié)的媒介。該家族的成員以膜-錨著的形式存在，局部通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞的接觸發(fā)揮作用，或者作為能擴(kuò)散至遠(yuǎn)處靶的分泌型蛋白起作用。平行的受體家族發(fā)出存在這些分子的信號(hào)，導(dǎo)致啟動(dòng)靶組織中的細(xì)胞死亡或細(xì)胞增殖和分化。目前，TNF家族的配體和受體有至少11對(duì)公認(rèn)的受體-配體對(duì)，包括TNF：TNF-R；LT-α：TNF-R；LT-α/β：LT-β-R；FasL：Fas；CD40L：CD40；CD30L：CD30；CD27L：CD27；OX40L：OX40和4-1BBL：4-1BB。甚至在最相關(guān)的情況下，編碼這些配體的DNA序列僅有約25％至約30％同一性，但氨基酸的相關(guān)性約為50％。

該細(xì)胞因子受體家族的確定特征體現(xiàn)在富含半胱氨酸的胞外結(jié)構(gòu)域，其最初由兩種不同的TNF受體的分子克隆揭示出。該基因家族編碼I型跨膜蛋白質(zhì)所特有的糖蛋白，其具有胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，單個(gè)膜跨越區(qū)域和參與活化細(xì)胞功能的胞質(zhì)區(qū)域。富含半胱氨酸的配體結(jié)合區(qū)域呈現(xiàn)出緊密交織的二硫鍵連接的核心結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域根據(jù)特定的家族成員而重復(fù)多次。大多數(shù)受體具有4個(gè)結(jié)構(gòu)域，但也有的受體具有少至3個(gè)，或多至6個(gè)結(jié)構(gòu)域。

TNF家族配體蛋白質(zhì)的特征在于一段短的N-末端序列，它一般是短的親水性氨基酸，經(jīng)常含有幾個(gè)據(jù)認(rèn)為可用作終止轉(zhuǎn)移序列的賴(lài)氨酸或精氨酸殘基。緊接著的是跨膜區(qū)域和各種長(zhǎng)度的胞外區(qū)域，其可將C-末端受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域與膜分開(kāi)。該區(qū)域有時(shí)也被稱(chēng)為“莖”。C-末端結(jié)合區(qū)域含有該蛋白質(zhì)的主要部分，并經(jīng)常，但不總是含有糖基化位點(diǎn)。這些基因缺乏I型膜蛋白，具有位于細(xì)胞外部的C末端的II型膜蛋白，和位于胞質(zhì)中的短的N-末端結(jié)構(gòu)域所特有的典型的信號(hào)序列。在某些情況下，例如對(duì)TNF和LT-α而言，在蛋白質(zhì)加工早期可發(fā)生莖區(qū)域中的裂解，然后發(fā)現(xiàn)配體主要為分泌形式。然而，大多數(shù)配體以膜形式存在，可介導(dǎo)局部的信號(hào)傳導(dǎo)。

對(duì)TNF，LT-α和CD40L的晶體學(xué)分析已較好地確定了這些配體的結(jié)構(gòu)。TNF和淋巴毒素-α(LT-α)均為夾心結(jié)構(gòu)，有兩個(gè)具有“果凍卷筒蛋糕(jellyroll)”或希臘鑰匙(Greek?key)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的反-平行β-折疊。Cα和β殘基之間的rms偏差是0.61C，暗示它們的分子拓?fù)鋱D具有高水平的相似性。CD40L，TNF和LT-α的分子研究所闡明的結(jié)構(gòu)特征是傾向于裝配成寡聚體復(fù)合物。寡聚體結(jié)構(gòu)的內(nèi)在特征是在產(chǎn)生多價(jià)配體的相鄰亞單位之間的連接處形成受體結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)分析其晶體結(jié)構(gòu)，證實(shí)TNF，CD40L和LT-α的四級(jí)結(jié)構(gòu)以三聚體的形式存在。在不同配體之間保守的氨基酸大多為支架型β-片層鏈。很可能在所有這些分子中保留了所述基本夾心結(jié)構(gòu)，因?yàn)槎鄠€(gè)家族成員之間的這些支架序列部分是保守的。由于亞單位構(gòu)象傾向于保持相似，因此，也可以維持四級(jí)結(jié)構(gòu)。

對(duì)TNF家族成員的最好描述是，其為控制細(xì)胞存活和分化的免疫系統(tǒng)的主開(kāi)關(guān)。與其它占優(yōu)勢(shì)的TNF家族膜錨著成員相反，目前只知TNF和LT-α是分泌型細(xì)胞因子。盡管已明確鑒定了TNF的膜形式，而且所述膜形式很可能具有獨(dú)特的生物學(xué)作用，但分泌形式的TNF可為距離觸發(fā)事件位點(diǎn)更遠(yuǎn)的細(xì)胞提供一般性的警示信號(hào)。因此，TNF分泌可以放大導(dǎo)致血管系統(tǒng)內(nèi)層明確改變和細(xì)胞炎性狀態(tài)的事件。與之相反，該家族的膜結(jié)合成員通過(guò)TNF型受體僅給直接接觸的細(xì)胞發(fā)送信號(hào)。例如，T細(xì)胞僅給那些經(jīng)由同族TCR相互作用直接接觸的B細(xì)胞提供CD40介導(dǎo)的“幫助”。在研究得較為充分的Fas系統(tǒng)中也存在類(lèi)似的細(xì)胞-細(xì)胞接觸對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡之能力的限制。