[發明專利]生長分化因子抑制劑及其用途

有效

• 申請號: 00805378.2
• 申請日: 2000-01-21
• 公開（公告）號: CN1355881A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: S·托普茲斯;J·F·賴特;T·拉托維茨基;L·F·梁;小J·L·布拉迪;D·辛哈;L·雅斯文－科爾克里
• 申請（專利權）人: 梅塔莫菲克斯公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68;C07K14/51;C07K14/475;C07K7/08;C07K7/06;A01K67/027;C12N9/00;C12N15/11
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 張廣育,劉玥

1.一種鑒定GDF蛋白抑制劑的方法，包括：

(a)獲得在其中已培養過產生GDF蛋白的細胞的培養基；

(b)測定此培養基抑制GDF活性的能力，從而鑒定GDF抑制劑。

2.權利要求1的方法，進一步包括在測定該培養基抑制GDF活性的能力之前對該培養基進行層析。

3.權利要求1的方法，進一步包括對從所述層析獲得的組分進行電泳。

4.權利要求1的方法，其中是用含有編碼GDF-蛋白的插入片段的質粒轉化所述的細胞。

5.權利要求4的方法，其中的細胞是CHO細胞。

6.權利要求1的方法，其中該細胞內源性地產生GDF蛋白。

7.權利要求2的方法，其中的層析法是離子交換層析和反相層析。

8.權利要求3的方法，其中的電泳選自制備性非還原SDS-PAGE和制備性還原SDS-PAGE。

9.權利要求1的方法，其中的GDF蛋白是人GDF蛋白。

10.權利要求1的方法，其中的GDF蛋白選自牛GDF-8或GDF-11，雞GDF-8或GDF-11，鼠GDF-8或GDF-11，大鼠GDF-8或GDF-11，豬GDF-8或GDF-11，綿羊GDF-8或GDF-11，火雞GDF-8或GDF-11，以及狒狒GDF-8或GDF-11。

11.權利要求1的方法，其中的測定是檢測肌肉特異性酶的活性。

12.權利要求11的方法，其中的肌肉特異性酶是肌酸激酶。

13.權利要求1的方法，其中的測定是檢測脂肪細胞分化。

14.權利要求13的方法，其中是檢測3T3-L1前脂肪細胞的分化。

15.權利要求1的方法，其中是應用基于轉錄的測定法進行測定。

16.權利要求1的方法，其中的GDF抑制劑是一種GDF多肽。

17.權利要求1的方法，其中該GDF抑制劑包含GDF蛋白的前功能區或前功能區的一部分。

18.一種鑒定GDF蛋白抑制劑的方法，包括：

(a)制備GDF蛋白的片段；

(b)測定這些片段抑制GDF活性的能力，從而鑒定GDF抑制劑。

19.權利要求18的方法，其中所述的片段是通過消化GDF蛋白來制備。

20.權利要求18的方法，其中的片段是人工合成的。

21.權利要求18的方法，進一步包括在測定這些片段抑制GDF活性的能力之前將它們分離出。

22.權利要求18的方法，進一步包括選擇不誘發T細胞介導應答的片段。

23.權利要求18的方法，進一步包括選擇具有將引發免疫應答的氨基酸序列的片段。

24.權利要求18的方法，其中的測定包括篩選所述片段引發免疫應答的能力，此免疫將導致產生GDF抑制抗體。

25.權利要求18的方法，其中的GDF蛋白是通過重組產生的。

26.權利要求18的方法，其中的GDF蛋白是天然GDF蛋白。

27.權利要求19的方法，其中是用蛋白酶消化該GDF蛋白。

28.權利要求27的方法，其中的蛋白酶選自胰蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶。

29.權利要求18的方法，其中這些片段的長度是10-25個氨基酸。

30.權利要求18的方法，其中這些片段的長度是25-40個氨基酸。

31.一種GDF-8或GDF-11抑制劑，它可以從已通過離子交換層析分離出其中CHO細胞的培養基中被分離出，此CHO細胞是用含有編碼人GDF-8或GDF-11的插入片段的表達質粒穩定轉染的細胞，在100℃加熱直到10分鐘之后此抑制劑仍保持活性，在還原之后它仍保持活性，以及在用6M尿素處理之后它仍保持活性。