[發明專利]減數分裂活化甾醇增大著床率

無效

• 申請號: 00804261.6
• 申請日: 2000-02-25
• 公開（公告）號: CN1341147A
• 公開（公告）日: 2002-03-20
• 發明（設計）人: C·Y·安德森;A·G·拜斯克夫
• 申請（專利權）人: 諾沃挪第克公司;舍林股份公司
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C07J9/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 周中琦

1.一種包括

-至少一種減數分裂活化甾醇(MAS)，MAS是在羊毛甾醇和膽固醇之間代謝途徑中任何甾醇，

-一種MAS類似物，或者

-能夠內源性刺激至少一種MAS累積的添加劑或多種添加劑的培養基用于體外受精的用途，其中從體外受精產生的前成胚具有改善的體內著床率。

2.至少一種MAS，一種MAS類似物，或能夠內源性刺激至少一種MAS在丘包封的卵母細胞中累積的添加劑或多種添加劑制備為體外受精培養基的用途，其中從體外受精產生的前成胚具有改善的體內著床率。

3.根據權利要求1或2的用途，其中MAS選自FF-MAS，T-MAS，1-甲基-酵母甾醇，和酵母甾醇。

4.根據前述權利要求中任何一項的用途，其中MAS是FF-MAS。

5.根據前述權利要求中任何一項的用途，其中MAS是T-MAS。

6.根據權利要求1或2的用途，其中培養基包括一種MAS類似物。

7.根據權利要求1或2的用途，其中該添加劑或多種添加劑導致在存在該添加劑或多種添加劑的條件下培養的丘包封的卵母細胞中MAS的相對含量之間至少為2的比值，該培養的丘包封的卵母細胞中MAS的相對含量通過如下方式測定：在從小鼠去除卵巢之前48小時用外源的促性腺激素刺激雌性小鼠，通過穿刺單個卵泡從卵巢回收丘包封的卵母細胞，并在補充了3mg/l牛血清白蛋白，5mg/ml人血清白蛋白，2mM?L-谷氨酰胺，100IU/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素，4mM次黃嘌呤和³H-mevalonat的α-MEM培養基中在37℃，100％濕度和含有5％CO₂的空氣中培養24小時，此后用50μl?3M?Na₂PO₄?pH＝1酸化，用5倍過量的正庚烷∶異丙醇(3∶1v/v)有機萃取三次，利用HPLC從有機相純化MAS，并測定在存在此添加劑或多種添加劑的條件下培養的丘包封的卵母細胞和不存在此添加劑或多種添加劑的條件下培養的丘包封的卵母細胞之間每個丘包封的卵母細胞的放射性的比值。

8.根據權利要求7的用途，其中此添加劑選自諸如FSH和類似物的促性腺激素，諸如EGF和類似物的生長激素，諸如A9944-A7的抑制甾醇Δ14-還原酶的化合物，抑制將T-MAS轉變成酵母甾醇的4-脫甲基酶的化合物，活化細胞色素P450羊毛甾醇14α-脫甲基酶的化合物和有兩性霉素樣作用的化合物。

9.根據權利要求8的用途，其中此添加劑是一種促性腺激素和一種生長激素的聯合。

10.根據權利要求9的用途，其中此添加劑是EGF和FSH的聯合。

11.根據權利要求8的用途，其中此添加劑是EGF。

12.根據權利要求8的用途，其中此添加劑是FSH。

13.根據權利要求10或12的用途，其中FSH是一種具有大于5.0的等電點的FSH同工型。

14.根據權利要求10，12或13的用途，其中此FSH衍生于天然存在的FSH，例如從尿提取的FSH，或來自FSH的。

15.根據權利要求10或12-14的用途，其中FSH的濃度是在2和200IUFSH/l之間。

16.根據權利要求10或11的用途，其中EGF的濃度是在1和10ngEGF/ml之間。

17.根據權利要求7或8的用途，其中此添加劑是兩性霉素。

18.根據前述權利要求中任何一項的用途，其中體外受精是人卵母細胞的體外受精。

19.一種體外受精的方法，包括步驟：將一個或多個MII卵母細胞與精子一起暴露和培養于一種培養基中，此培養基包括至少一種MAS，一種MAS類似物或能夠內源性刺激至少一種MAS累積的添加劑或多種添加劑；持續此暴露和培養直至形成了受精卵和/或前成胚。