[發明專利]新型酶

無效

• 申請號: 00803944.5
• 申請日: 2000-02-21
• 公開（公告）號: CN1340099A
• 公開（公告）日: 2002-03-13
• 發明（設計）人: 石丸香;八木雅之;米原聰
• 申請（專利權）人: 阿克雷株式會社
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N1/20;C12Q1/37
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 盧新華,劉玥

技術領域

本發明涉及新型的酶。

技術背景

蛋白酶可被用于多種多樣的產業領域。例如，在測定血清中的糖化白蛋白等糖化蛋白時，要使用這種酶，血清中的糖化白蛋白是診斷和治療糖尿病的重要指標。

應用蛋白酶測定糖化蛋白的方法可如下進行。例如，用蛋白酶水解糖化蛋白，讓水解產物與果糖基氨基酸氧化酶(以下稱作“FAOD”)反應，通過測定所生成的過氧化氫量或消耗的氧量可知道糖化蛋白質的量。蛋白酶可使用特開平5-192193號公報、特開平7-289253號公報中公開的。

如此，因為預先用蛋白酶處理了糖化蛋白質，上面所講的FAOD就很容易作用于糖化氨基酸和糖化肽，而對糖化蛋白質自身很難產生作用。尤其是糖化的血紅蛋白(以下，計作“HbAlc”)，由于其糖化部分是β鏈N末端的氨基酸殘基，FAOD對這部分的作用很容易，所以要尋求能處理HbAlc的蛋白酶。

發明的公開

本發明的目的是提供上述能處理糖化蛋白質，使FAOD對糖化蛋白質和糖化肽的作用容易的酶。

首先，本發明者們研究了各種FAOD中，對α-氨基鍵合了糖的糖化蛋白質、糖化肽及糖化氨基酸等起作用的FAOD的作用機制。結果發現，上述FAOD對α-氨基鍵合了糖的糖化氨基酸作用良好，但對上述糖化蛋白質和糖化肽的作用很難。基于此，本發明者們分離培養了自然界的各種菌，檢測了它們產生的酶，結果成功地分離出能從α-氨基(N末端氨基)鍵合了糖的糖化蛋白質、糖化肽中釋放出α-氨基糖化了的氨基酸(α-Glycated?Amino?acid，以下稱作α-GA)的新型酶的生產菌，完成了本發明。因為應用本發明的新型酶(α-Glycated?Amino?acid?Releasing?Enzyme，以下稱作α-GARE)可以從上述糖化蛋白質和糖化肽中釋放出α-GA，所以應用對α-GA發揮優良作用的FAOD進行HbAlc的臨床檢驗等可實用化。除用于HbAlc的測定外，也可在其它糖化蛋白質的測定等不同領域應用。除本發明的促進α-GARE和α-GA釋放的機能外，還有其它的催化機能，例如切斷其它肽鍵合的機能。本發明者們分離出的菌體有棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、假單胞菌屬(Pseudomonas)等菌體。本發明的α-GARE不限于來源于這些菌體。

本發明的α-GARE釋放的糖化氨基酸，并不特別限定于其α-氨基發生糖化，但如前所述，由于HbAlc的N末端纈氨酸殘基發生糖化，所以優選釋放的α-GA為糖化的纈氨酸(以下稱作α-GV)。

本發明的α-GARE是如下所示的兩種類的α-GARE。

首先，一種α-GARE(以下叫做α-GARE-1)是來源于棒狀桿菌屬(Corynebacterium)的菌體，特別優選來自解脲棒狀桿菌KDK1002(Corynebacterium?ureolyticum?KDK?1002)。該解脲棒狀桿菌KDK1002(Corynebacterium?ureolyticum?KDK?1002)是本發明者們從土壤中分離出的新型菌體，保藏于通商產業省工業技術院生命工學工業技術研究所(NIBH)(日本國305-0046茨城縣筑波市東1丁目1-3)，保藏號為FERMP-17135(保藏日：平成11年1月11日)。本菌體的菌學特征如下。

(形態特征)

本菌體的現狀是大小0.8×1.2μm的桿菌，非運動性。

(培養性質)

讓該菌體在普通瓊脂培養基上生育時，其菌落的形態是低凸起的圓形，其菌落的顏色為乳白色。

(生理學特性)

革蘭氏染色：陽性

氧要求性：厭氧

硝酸鹽還原：-

吡嗪酰胺酶：+

吡咯烷基烯丙基酰胺酶：-

堿性磷酸酶：-

β-葡萄糖醛酸酶：-

B-半乳糖苷酶：-

α-葡萄糖苷酶：-

N-乙酰-β-葡萄糖胺酶：-

七葉苷(葡萄糖苷酶)：-

脲酶：+

液化明膠：-

β-溶血性：-

碳水化合物的發酵性：-

葡萄糖：-

核糖：-

木糖：-

甘露醇：-

麥芽糖：-

乳糖：-

白糖：-

糖原：-