[發明專利]短鏈化多核苷酸及其制備方法

無效

• 申請號: 00803787.6
• 申請日: 2000-02-14
• 公開（公告）號: CN1340055A
• 公開（公告）日: 2002-03-13
• 發明（設計）人: 松山伸二;石山幸一;關純造;大木忠明
• 申請（專利權）人: 日本新藥株式會社
• 主分類號: C07H21/02
• 分類號: C07H21/02;A61K31/7088;A61P37/04;A61P43/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 章鳴玉

技術領域

本發明涉及作為醫藥品特別有效的短鏈化多核苷酸及其制備方法。具體來講，本發明是以合成的短鏈化多核苷酸或其鹽中的2’-5’磷酸二酯鍵占全部磷酸二酯鍵的3％以下，即，對應于所有磷酸二酯鍵的磷酸基團，從3’位轉移到2’位的磷酸基團的比例(磷酸位移率)在3％以下為特征的短鏈化多核苷酸或其鹽，以及它們的制備方法。

背景技術

聚肌苷酸·聚胞苷酸，即，以聚[I]·聚[C]為代表的多核苷酸是本領域技術人員公知的化合物，由于其具備干擾素誘導作用和免疫活性作用等，所以，對其作為肝炎治療劑和癌治療劑使用的可能性進行了研究。

多核苷酸的藥理作用與其鏈長有關，鏈越長，其干擾素誘導作用等越強。但是，反過來考慮，鏈越長顯現出的毒性也越強。

最近，嘗試對多核苷酸進行水解，將獲得的合成的短鏈化多核苷酸封入象陽離子脂質體那樣的可將藥物移入細胞內的有效載體中的方法，這樣不僅能夠維持多核苷酸的有效藥理作用，還可減弱毒性(例如，PCT?WO?99/20283號、PCTWO?99/48531號)。

但是眾所周知，如果象以上所述那樣通過水解而使多核苷酸短鏈化，則在短鏈化的同時因為偽旋轉機理而使部分磷酸基團從3’位轉移2’位發生分子內位移(參考《蛋白質、核酸、酶》Vol.40，No.10，pp1323-1332(1995))。其結果是，短鏈化多核苷酸分子內的部分3’-5’磷酸二酯鍵被2’-5’磷酸二酯鍵置換。這種磷酸基團的位移現象是否會影響到藥理作用等目前還不清楚。

發明的揭示

本發明的目的是提供作為醫藥品有效且安全的短鏈化多核苷酸及其鹽，以及其短鏈化雙鏈多核苷酸及其鹽。

本發明者們經過認真研究后發現了在短鏈化反應時生成的2’-5’磷酸二酯鍵僅在一定比例以下的短鏈化多核苷酸及其鹽中，解決了上述問題，從而完成了本發明。

本發明之一是短鏈化多核苷酸或鹽，其特征是，2’-5’磷酸二酯鍵占所有磷酸二酯鍵的3％以下，更好是2％以下。

此外，本發明還涉及上述2’-5’磷酸二酯鍵占所有磷酸二酯鍵的3％以下，更好是2％以下的短鏈化多核苷酸或其鹽中，由可形成雙鏈的2個短鏈化多核苷酸或其鹽構成的雙鏈短鏈化多核苷酸或其鹽。本發明進一步涉及包含以可將藥物移入細胞內的有效載體和上述2’-5’磷酸二酯鍵占所有磷酸二酯鍵的3％以下的短鏈化多核苷酸或其鹽，或和可形成雙鏈的2個短鏈化多核苷酸或其鹽形成的具有雙鏈的短鏈化多核苷酸或鹽為必須構成組分的復合體的組合物。

本發明的多核苷酸是各種核苷酸通過磷酸二酯鍵發生直鏈聚合反應形成的化合物，核苷酸數大約在20個以上，可以是天然的也可以是合成的。具體例子包括聚肌苷酸(即，聚(I))或其類似物、聚胞苷酸(即，聚(C))或其類似物、聚腺苷酸(即，聚(A))或其類似物、或聚尿苷酸(即，聚(U))或其類似物。

聚肌苷酸類似物是全部或部分肌苷酸經過化學修飾而獲得的均聚物，或肌苷酸和其他核苷酸的共聚物。例如，聚(7-脫氮肌苷酸)、聚(2’-疊氮肌苷酸)。聚胞苷酸類似物是全部或部分胞苷酸經過化學修飾而獲得的均聚物，或胞苷酸和其他核苷酸的共聚物。例如，聚(5-溴胞苷酸)、聚(2-硫代胞苷酸)、聚(胞苷酸-5’-硫代磷酸)、聚(胞苷酸、尿苷酸)、聚(胞苷酸、4-硫代尿苷酸)、聚(1-乙烯基胞苷酸)。聚腺苷酸類似物和聚尿苷酸類似物也是如此。其中，適合于本發明的是聚肌苷酸和聚胞苷酸。

本發明的短鏈化多核苷酸的平均鏈長一般為0.1k?bases～1kbases(base：堿基的個數，1k?bases表示1000個堿基，以下將“base(s)”簡稱為“b”)，較好是200b～800b，更好為300b～600b。該平均鏈長如下面的試驗例5所述，可以通過凝膠滲透色譜法(gel?permeation?chromatography，以下稱為“GPC法”)容易地確定。

本發明的短鏈化多核苷酸的磷酸位移率一般在3％以下，較好在2％以下或0.1％～2％，更好是在1％以下或0.1％～1％。