[發明專利]在缺乏環己縮酚肽的細胞中制備多肽的方法

有效

• 申請號: 00803757.4
• 申請日: 2000-01-13
• 公開（公告）號: CN1340105A
• 公開（公告）日: 2002-03-13
• 發明（設計）人: R·M·博卡;M·W·雷;W·T·約德
• 申請（專利權）人: 諾沃奇梅茲生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N15/60;C12N9/88;C12N1/14;//
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 黃革生

1.制備異源多肽的方法，包括：

(a)在有利于該異源多肽產生的條件下培養親本絲狀真菌細胞的突變體，其中(i)該突變體含有編碼該異源多肽的第一核酸序列，而且(ii)當在相同條件下培養時該突變體比親本絲狀真菌細胞產生較少的環己縮酚肽；和

(b)從該培養基中分離該異源多肽。

2.權利要求1的方法，其中所述絲狀真菌細胞是枝頂孢屬、曲霉屬、短梗霉屬、隱球酵母屬、Filibasidium、鐮孢霉屬、赤霉屬、腐質霉屬、Magnaporthe、毛霉屬、毀絲霉屬、漆斑菌屬、Neocallimastix、脈孢菌屬、擬青霉屬、青霉屬、Piromyces、裂褶菌屬、Talaromyces、嗜熱子囊菌屬、梭孢殼屬、Tolypocladium或木霉屬細胞。

3.權利要求1的方法，其中所述絲狀真菌細胞是鐮孢霉屬細胞。

4.權利要求3的方法，其中所述鐮孢霉屬細胞是Fusariumvenenatum細胞。

5.權利要求4的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是Fusarium?venenatum?ATCC?20334。

6.權利要求4的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是形態突變體。

7.權利要求6的方法，其中所述Fusarium?venenatum細胞是Fusarium?venenatum?ATCC?20334的形態突變體。

8.權利要求1-7之任一項的方法，其中所述突變細胞含有第二核酸序列，其中該核酸序列含有對環己縮酚肽產生所涉及的至少一個基因的修飾。

9.權利要求8的方法，其中所述基因選自環己縮酚肽合成酶基因、恩鐮孢素合成酶基因和D-羥基異戊酸脫氫酶基因。

10.權利要求8的方法，其中所述基因之一是環己縮酚肽合成酶基因。

11.權利要求8的方法，其中所述基因之一是恩鐮孢素合成酶基因。

12.權利要求8的方法，其中所述基因之一是D-羥基異戊酸脫氫酶基因。

13.權利要求1-12之任意一項的方法，其中當在相同條件下培養時所述突變細胞比親本絲狀真菌細胞產生少至少大約25％的環己縮酚肽。

14.權利要求1-13之任意一項的方法，其中所述突變細胞不產生環己縮酚肽。

15.權利要求1-14之任意一項的方法，其中所述絲狀真菌細胞含有至少兩個拷貝的所述第一核酸序列。

16.權利要求1-15之任意一項的方法，其中所述異源多肽是激素、激素變體、酶、受體或其部分、抗體或其部分、或報道分子。

17.權利要求16的方法，其中所述酶是氧化還原酶、轉移酶、水解酶、裂合酶、異構酶或連接酶。

18.權利要求17的方法，其中所述酶是氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、過氧化氫酶、纖維素酶、幾丁質酶、角質酶、環糊精糖基轉移酶、脫氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、轉化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、mutanase、氧化酶、果膠溶酶、過氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白酶、核糖核酸酶、谷氨酰胺轉移酶或木聚糖酶。

19.權利要求1-18之任意一項的方法，其中所述突變細胞還含有對一個或多個第三核酸序列的修飾，其中該修飾降低或消除了該一個或多個第三核酸序列的表達。

20.權利要求19的方法，其中所述第三核酸序列編碼選自下組的酶：氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、過氧化氫酶、纖維素酶、幾丁質酶、角質酶、環糊精糖基轉移酶、脫氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、轉化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、mutanase、氧化酶、果膠溶酶、過氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白酶、核糖核酸酶、谷氨酰胺轉移酶或木聚糖酶。

21.權利要求19之任意一項的方法，其中所述第三核酸序列編碼蛋白酶。