[發明專利]鳥類多能胚胎生殖細胞系

無效

• 申請號: 00803553.9
• 申請日: 2000-02-11
• 公開（公告）號: CN1373798A
• 公開（公告）日: 2002-10-09
• 發明（設計）人: 韓在容;樸泰燮
• 申請（專利權）人: 韓在容;韓美藥品工業株式會社
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 胡交宇

1.一種制備已建立的鳥類胚胎生殖(EG)細胞系的方法，包括以下步驟：

(a)在補加細胞生長因子和分化抑制因子的培養基中培養從鳥胚胎生殖腺分離出的原生殖細胞(PGC)，以便獲得EG細胞集落；

(b)在與步驟(a)相同的培養基中，應用飼喂層培養EG細胞，直到EG細胞建群；和

(c)提取并在與步驟(a)相同的培養基中傳代培養EG細胞，以便建立EG細胞系。

2.權利要求1的方法，其中鳥類胚胎生殖腺處于14至36期。

3.權利要求2的方法，其中鳥類胚胎生殖腺處于24至30期。

4.權利要求1的方法，其中鳥類品種是火雞、小雞、鵪鶉、雉或鴨子。

5.權利要求1的方法，其中當在步驟(a)中培養原生殖細胞時，使用一層生殖脊基質細胞(GRSC)作為飼喂層。

6.權利要求1的方法，其中生長因子選自干細胞因子(SCF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、白介素-11(IL-11)、胰島素樣生長因子-I(IGF-I)和它們的混合物。

7.權利要求1的方法，其中培養基附加選自0.05-500ng/ml?SCF、0.1-1000ng/ml?bFGF、0.0004-4ng/ml?IL-11、0.1-1000ng/ml?IGF-1和它們混合物的生長因子。

8.權利要求1的方法，其中分化抑制因子是白血病抑制因子(LIF)。

9.權利要求8的方法，其中LIF的量為0.1-1000單位/ml。

10.權利要求1的方法，其中培養基進一步含有哺乳動物或鳥類血清。

11.權利要求1的方法，其中培養基進一步含有選自丙酮酸鈉、谷氨酰胺、β-巰基乙醇和它們混合物的補加成分。

12.權利要求1的方法，其中飼喂層具有有絲分裂活性。

13.權利要求1或12的方法，其中飼喂層是成纖維細胞或其等同物。

14.權利要求13的方法，其中成纖維細胞是鳥類成纖維細胞或鳥類胚胎成纖維細胞。

15.權利要求14的方法，其中鳥類品種是小雞。

16.一種按照權利要求1的方法制備的鳥類胚胎生殖(EG)細胞系。

17.權利要求16的鳥類EG細胞系，其可以通過反復繼代培養維持。

18.權利要求16的鳥類EG細胞系，其表達SSEA-1抗原、形成胚狀體、并分化和形成多種組織。

19.權利要求16的鳥類EG細胞系，其是具有與保藏號為KCLRF-BP-00026的雞胚生殖細胞系基本上相同特征的雞胚生殖細胞系。

20.一種制備體細胞或種系嵌合體的方法，包括將權利要求16的鳥類EG細胞注射到卵細胞中。

21.權利要求20的方法，其中將EG細胞注射到生殖腔或卵細胞的血管中。

22.權利要求21的方法，其中將EG細胞注射到X期的卵細胞的生殖腔中。

23.權利要求21的方法，其中將EG細胞注射到13至17期的卵細胞的血管中。

24.一種將外源基因轉染到EG細胞或PGC中的方法，特征在于應用電穿孔或脂質體。

25.一種篩選穩定轉染的EG細胞或PGC的方法，包括在含抗生素的培養基中傳代培養轉染了外源基因的EG細胞。