[發明專利]膜囊泡的制法

無效

• 申請號: 00802903.2
• 申請日: 2000-01-19
• 公開（公告）號: CN1355704A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: 奧利維耶·德林;塞巴斯萊昂·阿米戈雷納;菲利普·拉莫;若埃爾·克魯澤
• 申請（專利權）人: AP細胞股份有限公司;法國國家衛生及研究醫學協會;法國居里學院
• 主分類號: A61K35/12
• 分類號: A61K35/12;C12N5/00;//A61K39/00
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 丁業平,王維玉

1.一種由生物樣品制備膜囊泡的方法，其特征在于，至少包括一個對樣品的陰離子交換層析處理。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，至少包括一個強陰離子交換層析處理步驟。

3.如權利要求1及2中任何一項所述的方法，其特征在于，至少包括一個陰離子交換與凝膠滲透層析步驟。

4.如上述權利要求中任何一項的方法，其特征在于，所述生物樣品是生物流體、培養上清液、溶胞液或經預純化的溶液。

5.一種由生物樣品制備膜囊泡的方法，其特征在于，至少包括：

b)樣品處理，以制備富含膜囊泡的樣品，與

c)樣品的陰離子交換層析和/或凝膠滲透層析處理。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，其包括：

a)將膜囊泡(例如胞外體)生成細胞群落于可使囊泡釋放的條件下培養，

b)膜囊泡富集步驟，與

c)樣品的陰離子交換層析和/或凝膠滲透層析處理。

7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述富集步驟包括澄清階段，任選繼之以濃縮階段。

8.如權利要求5～7中任何一項所述的方法，其特征在于，所述富集步驟包括親和層析步驟，優選在染料上進行。

9.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述富集步驟包括低速離心步驟和/或過濾。

10.如權利要求7～9中任何一項所述的方法，其特征在于，所述富集步驟至少包括一個超濾步驟，特別是切向超濾。

11.一種制備膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下列步驟：

a)將膜囊泡(例如胞外體)生成細胞群落于可使囊泡釋放的條件下培養，

b)以至少一次超濾或親和層析步驟處理培養上清液，以產生富含膜囊泡(例如胞外體)的生物樣品，與

c)該生物樣品的陰離子交換層析和/或凝膠滲透層析處理步驟。

12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，進一步包括對經處理的制備物的過濾步驟d)。

13.如上述權利要求中任何一項所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡的直徑介于約60～90納米。

14.如上述權利要求中任何一項所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由抗原呈遞細胞所產生的囊泡，特別是由樹狀細胞、B淋巴細胞、巨噬細胞或肥大細胞所產生的囊泡。

15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由樹狀細胞所產生，特別是由人樹狀細胞所產生。

16.如權利要求1-13中任何一項所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由腫瘤細胞所產生，特別是人腫瘤細胞所產生。

17.一種制備膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下步驟：

a)獲得一樹狀細胞群落，

b)在可促使膜囊泡產生的條件下培養所述的樹狀細胞，與

c)利用一種至少包括陰離子交換層析處理在內的方法純化所述的膜囊泡。

18.一種制備膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下列步驟：

a)獲得一樹狀細胞群落，

b)于可促使膜囊泡產生的條件下培養所述的樹狀細胞，

c)處理該培養上清液以產生富含膜囊泡的生物樣品，特別是利用超濾或親和層析步驟進行，與

d)利用一種至少包括陰離子交換和/或凝膠滲透層析步驟在內的方法純化所述膜囊泡。

19.如權利要求17或18所述的方法，其特征在于，所述樹狀細胞取自從測試對象獲得的生物樣品例如骨髓或外周血液。

20.如權利要求17至19項所述的方法，其特征在于，所述樹狀細胞未成熟。

21.如權利要求17至20中任何一項所述的方法，其特征在于，所述樹狀細胞在產生膜囊泡之前先經抗原致敏。

22.如權利要求17至21項中任何一項所述的方法，其特征在于，在步驟b)中是將所述樹狀細胞于刺激膜囊泡產生的條件下培養。

23.陰離子交換層析用于制備或純化膜囊泡的應用。