[發明專利]骨刺激因子

無效

• 申請號: 00802780.3
• 申請日: 2000-01-13
• 公開（公告）號: CN1341120A
• 公開（公告）日: 2002-03-20
• 發明（設計）人: 徹克·興·泰姆
• 申請（專利權）人: 骨藥公司
• 主分類號: C07K14/52
• 分類號: C07K14/52;A61K38/19;G01N33/53;C12N15/19
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 丁業平,王維玉

本申請要求申請日為1999年1月13日的美國專利申請No.09/229,304的優先權，后者是在先的美國專利申請No.09/048,058(申請日為1998年3月26日)的部分繼續申請，這兩個在先申請皆引入本文做參考。

本發明涉及能刺激骨生長的多肽。

對有關骨生長和強度的問題在過去的幾年中有了進一步的理解。例如，在國際專利申請No.PCT/CA94/00144(1994年9月15日公開，公開號為94/20615)、國際專利申請No.PCT/CA96/00653(1997年4月3日公開，公開號為WO97/12036)、美國專利No.5320970和歐洲專利申請No.92302446(1992年9月23日公開，公開號為505210)中有這方面的概述。將這些申請的內容在此引入本文做參考。

下面描述本發明的背景。嗜中性粒細胞活化性肽(NAP-2；SEQ?IDNO：1)和NAP-2的變體(在此稱作“NAP-2V”(SEQ?ID?NO：2)為人們所知已有一段時間了(Walz，A.和M.Baggiolini，1989，生化與生物物理研究通訊(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，159：969)。英國專利No.2231872(英國專利2231872，發明人為M.Baggiolini，K.J.Clemetson和A.Walz，1990年6月14日公布)描述了NAP-2的氨基酸序列及3個顯然天然存在的變體，包括NAP-2V。另外兩個變體在NAP-2序列的N末端多出四個(SEQ?ID?NO：3)和三個(SEQ?ID?NO：4)氨基酸。NAP-2是β-血小板球蛋白(β-TG；SEQ?ID?NO：5)的亞序列，β-TG在N末端多出11個氨基酸，β-TG本身是結締組織活化性肽(CTAP-III；SEQ?ID?NO：6)的亞序列，CTAP-III在N末端多出4個氨基酸，是血小板堿性蛋白(PBP；SEQ?ID?NO：7)的亞序列，PBP在N末端多出9個氨基酸。

NAP-2與白細胞介素-8(人IL-8；SEQ?ID?NO：8；豬IL-8?SEQ?IDNO：9)和黑素瘤生長刺激活性(MGSA)一起，被指定為已知的α-趨化因子的亞家族。通常，在高度保守的位置，α-趨化因子彼此帶有4個半胱氨酸殘基，其內含分子的核心區，如Brandt等描述的那樣(Ehlert，J.E.，F.Peterson，M.H.G.Kubbuta，J.Gerdes，H.D.Flad和E.Brandt，1995.生物化學雜志(J.Biol.Chem)270：6338)。Brandt等發現一個顯然天然存在的C末端截短的NAP-2變體，其缺少了NAP-2的后面4個氨基酸，刺激嗜中性白細胞脫粒的效力增強。Brandt等還合成了缺少NAP-2的C末端最后1個、2個、3個、5個和6個氨基酸的變體。所有這些C端截短的多肽，效力比NAP-2適度增加，只具有NAP-2前面64個氨基酸的序列除外。對于NAP-2的結構及其功能，Brandt等對序列修飾的可能意義進行了討論。

血小板因子4(PF4；SEQ?ID?NO：10)為一70個氨基酸的多肽(Hermodson，M.，G.Schmer和K.Kurachi，1977，生物化學雜志(J.Biol.Chem)，252：6276；Morgan，F.J.，G.S.Begg，C.N.Chesterman，1979，Tromb.Haemost.42：1652)。PF4表現出對兩種成骨骨肉瘤細胞系增生的抑制，這兩種細胞系為Saos-2和G-292(美國專利號為No.5304542，發明人：D.M.Takakis，1994年4月19日出版)。吲哚美辛明顯地不影響由PF4誘導的對細胞增生的抑制。特定片斷PF4(58-70)、PF4(47-70)以及單體低親合力PF4(LAPF4)也被認為是有作用的，LAPF4與PF4有50％的同源性并包含α螺旋的C末端。因此，在抑制成骨細胞增生的方法中，PF4和這些有關的多肽是有用的，尤其是用于患骨質疏松癥的人。

NAP-2V的前70個氨基酸與PF4的序列有大約51％的同源性，4個半胱氨酸的位置在兩個多肽中是保守的。