[發(fā)明專(zhuān)利]控制OmpT蛋白酶切割的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00800626.1
• 申請(qǐng)日: 2000-03-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1302337A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 奧野和昭;田雅之;大末和廣
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 三得利株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/02
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/02;C12N15/09;//;C12R119)
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 黃革生

1．控制OmpT蛋白酶對(duì)多肽進(jìn)行切割的方法，它包括將所述多肽中由兩任意連續(xù)氨基酸組成的序列位點(diǎn)和/或所說(shuō)位點(diǎn)附近的氨基酸轉(zhuǎn)換成其它氨基酸，其特征在于，(1)設(shè)置賴(lài)氨酸或精氨酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-1位置處的氨基酸，設(shè)置特異氨基酸為+1位置處的氨基酸；和/或(2)設(shè)置特異氨基酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-4和/或-6位置處的氨基酸；以便所說(shuō)多肽的合乎需要部分被OmpT蛋白酶切割和/或所說(shuō)多肽的不合乎需要部分不(或幾乎不)被OmpT蛋白酶切割。

2．權(quán)利要求1的方法，其特征在于，如果所說(shuō)多肽中由兩任意連續(xù)氨基酸組成之序列位點(diǎn)的-1位置的氨基酸既非賴(lài)氨酸也非精氨酸，則將所說(shuō)氨基酸轉(zhuǎn)換成賴(lài)氨酸或精氨酸，并將+1位置的氨基酸設(shè)置為氨基酸X(其中X是除谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸、賴(lài)氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸或纈氨酸之外的氨基酸)，以便多肽的合乎需要部分被OmpT蛋白酶切割。

3．如權(quán)利要求1的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之兩任意連續(xù)氨基酸組成的序列位點(diǎn)的多肽中，將所說(shuō)位點(diǎn)的氨基酸和/或其附近的氨基酸轉(zhuǎn)換成其它氨基酸，其特征在于(1)設(shè)置賴(lài)氨酸或精氨酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-1位置處的氨基酸，設(shè)置特異氨基酸為+1位置處的氨基酸；和/或(2)設(shè)置特異氨基酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-4和/或-6位置處的氨基酸；以便所說(shuō)多肽的合乎需要部分可被OmpT蛋白酶切割。

4．如權(quán)利要求3的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之兩任意連續(xù)氨基酸組成的序列位點(diǎn)的多肽中，將所說(shuō)位點(diǎn)的氨基酸和/或其附近的氨基酸轉(zhuǎn)換成其它氨基酸，其特征在于(1)設(shè)置賴(lài)氨酸或精氨酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-1位置處的氨基酸，設(shè)置氨基酸X(其中X是除谷氨酸、天冬氨酸或脯氨酸之外的氨基酸)為+1位置處的氨基酸；和/或(2)設(shè)置氨基酸X(其中X是除酸性氨基酸之外的氨基酸)為所說(shuō)序列中-4和/或-6位置處的氨基酸。

5．權(quán)利要求1、3或4的方法，其特征在于，-4和/或-6位置處的氨基酸是堿性氨基酸。

6．權(quán)利要求5的方法，其特征在于，-4和/或-6位置處的氨基酸是賴(lài)氨酸或精氨酸。

7．權(quán)利要求1的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之兩任意連續(xù)氨基酸組成的序列位點(diǎn)的多肽中，將所說(shuō)位點(diǎn)的氨基酸和/或其附近的氨基酸轉(zhuǎn)換成其它氨基酸，其特征在于(1)設(shè)置賴(lài)氨酸或精氨酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-1位置處的氨基酸，設(shè)置特異氨基酸為+1位置處的氨基酸；和/或(2)設(shè)置特異氨基酸為相對(duì)于所說(shuō)位點(diǎn)為-4和/或-6位置處的氨基酸；以便所說(shuō)多肽的不合乎需要部分不(或幾乎不)被OmpT蛋白酶切割。

8．如權(quán)利要求7的方法，它包括，在具有由OmpT蛋白酶可切割之兩任意連續(xù)氨基酸組成的序列位點(diǎn)的多肽中，將所說(shuō)位點(diǎn)的氨基酸和/或其附近的氨基酸轉(zhuǎn)換成其它氨基酸，其特征在于(1)設(shè)置賴(lài)氨酸或精氨酸為所說(shuō)位點(diǎn)-1位置處的氨基酸，設(shè)置氨基酸X(其中X是谷氨酸、天冬氨酸或脯氨酸)為+1位置處的氨基酸；和/或(2)設(shè)置酸性氨基酸為所說(shuō)序列中-4位置和/或-6位置處的氨基酸。

9．如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，包括在宿主細(xì)胞中表達(dá)基因，該基因編碼由通過(guò)切割位點(diǎn)(任選地位于連接肽中)與保護(hù)肽融合之靶多肽組成并在所說(shuō)切割位點(diǎn)處可被OmpT蛋白酶切割的融合蛋白質(zhì)，用OmpT蛋白酶在所說(shuō)切割位點(diǎn)處切下蛋白質(zhì)，從而從所說(shuō)的融合蛋白質(zhì)中獲得靶多肽。

10．如權(quán)利要求9的方法，其中OmpT蛋白酶可切割之氨基酸序列存在于組成所說(shuō)融合蛋白質(zhì)之保護(hù)肽、連接肽和/或靶多肽的氨基酸序列中。

11．生產(chǎn)靶多肽的方法，它包括在宿主細(xì)胞中表達(dá)基因，該基因編碼由通過(guò)切割位點(diǎn)(任選地位于連接肽中)與保護(hù)肽融合之靶多肽組成并在所說(shuō)切割位點(diǎn)處可被OmpT蛋白酶切割的融合蛋白質(zhì)，以及通過(guò)OmpT蛋白酶在所述切割位點(diǎn)處切割蛋白質(zhì)從而從所述融合蛋白質(zhì)獲得靶多肽，其特征在于如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述轉(zhuǎn)換所說(shuō)切割位點(diǎn)處的氨基酸和/或所說(shuō)位點(diǎn)附近的氨基酸。

12．如權(quán)利要求11的方法，其中OmpT蛋白酶可切割之氨基酸序列存在于組成所說(shuō)融合蛋白質(zhì)之保護(hù)肽、連接肽和/或靶多肽的氨基酸序列中。