[發明專利]一種新的多肽——胰島素類似生長因子結合蛋白66.77和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00136343.3
• 申請日: 2000-12-26
• 公開（公告）號: CN1361171A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P43/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——胰島素類似生長因子結合蛋白66.77，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

IGF-1和IGF-II都是在結構和功能上與前胰島素原同源的促有絲分裂多肽[Rinderknecht?E，Humbel?R.1978.J?Biol?Chem?253：2769-2776][Froesch?ER，Schmi

d?C?et?al.，Rev?Physio147：443-467]。IGF在軟骨和其它組織中對GH生長促進效應物的調節是現在生物學家研究的重點，并且IGF可能同時在胎兒的生長和發育中起著非常重要的作用，尤其是在中樞神經系統中。

IGF與許多蛋白都有非常強的親和力，很少單獨存在。在細胞表面，IGF與IGF-1和IGF-II的膜結合受體緊密結合，同時也有可能與其他的膜結合蛋白結合[DeVrode?M，Tseng?L，Katsoyannis?P?et?al.，1986.J?Clin?Invest?77：602-613]。到目前為止，已經發現了分子量為150、30、53kDa的和其他分子量從24到160?kDa的特異性結合蛋白。所有的30?kDa的結合蛋白質有相似的氨基酸組成，并且在N末端的前10個氨基酸是一致的。很可能這些蛋白是同一種蛋白，而53?kDa蛋白由于有自己特別的N末端序列而出現與30?kDa蛋白的結構差異性[BaxterR，Martin?J1987.Biochem?Biophys?Res?Commun147：408-415]?，F在還不清楚的是，30?kDa結合蛋白是不是53?kDa和150?kDa結合蛋白的組成成分，或者是不是他們的非共價鍵結合的亞基或是同一個結合蛋白的不同RNA剪接形式。

由人HEP?G2肝細胞瘤細胞產生的IGF結合蛋白，，分子量為25，274，命名為IGF?BP-25。IGF-BP完整cDNA有1553個bp，包括164bp的5’非編碼區，一個777bp的開放閱讀框以及一個612bp的3’非編碼區，其中612bp的3’非編碼區有一個位于3’-poly(A)尾巴上游區域12bp腺甘酸化信號。IGF-BP蛋白N末端的25個氨基酸殘基包含了典型的分裂信號肽成分：一個帶有正電荷氨基酸殘基(8個)的N末端區域，一個疏水性中心區域(8個氨基酸)和一個極性的C末端區域。成熟IGF?BP-25有234個氨基酸殘基，N末端的59個氨基酸殘基組成了一個半胱氨酸富含區。在該結構域內，半胱氨酸殘基占了19％，并且它們的間距是規則的。這些半胱氨酸殘基對于結合蛋白的結構和功能都起著非常重要的作用。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與胰島素類似生長因子結合蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為胰島素類似生長因子結合蛋白66.77。

由于如上所述胰島素類似生長因子結合蛋白66.77蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的胰島素類似生長因子結合蛋白66.77蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新胰島素類似生長因子結合蛋白66.77蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——胰島素類似生長因子結合蛋白66.77以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼胰島素類似生長因子結合蛋白66.77的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼胰島素類似生長因子結合蛋白66.77的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產胰島素類似生長因子結合蛋白66.77的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——胰島素類似生長因子結合蛋白66.77的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——胰島素類似生長因子結合蛋白66.77的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與胰島素類似生長因子結合蛋白66.77異常相關的疾病的方法。