[發明專利]一種新的多肽——酰基輔酶A脫氫酶12.65和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00136321.2
• 申請日: 2000-12-26
• 公開（公告）號: CN1361254A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——酰基輔酶A脫氫酶12.65，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

生物體內的呼吸鏈由下列幾類分子組成：吡啶核苷酸連接的脫氫酶，黃素相關的脫氫酶(即黃素蛋白)、鐵硫蛋白、輔酶Q及細胞色素等。黃素相關的脫氫酶系是呼吸鏈的主要組分，常見的有兩種：以黃素單核苷酸(FMN)為輔基的NADH脫氫酶和以黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)為輔基的琥珀酸脫氫酶。FMN和FAD分子在生物體內參與加氫和脫氫反應，是傳遞兩個氫原子的遞氫體。

酰基輔酶A脫氫酶為一種黃素蛋白，在生物體內催化酰基輔酶A酯的α、β脫氫反應，并將電子轉運給電子轉運蛋白ETF。至今，人們已克隆得到了多個酰基輔酶A脫氫酶家族的成員，有長鏈酰基輔酶A脫氫酶、短鏈酰基輔酶A脫氫酶及異戊酰輔酶A脫氫酶等。對鼠酰基脫氫酶家族各成員的氨基酸序列進行分析發現，該家族的成員，無論是長鏈酰基輔酶A脫氫酶還是短鏈酰基輔酶A脫氫酶或異戊酰輔酶A脫氫酶均有較高的同源度，這暗示著這些蛋白可能由同一個基因祖先進化而來[Matsubara?Y.，Indo?Y.et?al.，1989，J.Biol.Chem.，264：16321-16331]。該脫氫酶家族的成員在生物體內有著重要的生理學功能，它們直接調節著生物體內的呼吸鏈，其表達異常將導致呼吸鏈的功能異常，從而導致生物體能量轉換系統的功能異常，及引發與之相關的各種疾病。而異戊酰輔酶A脫氫酶的功能異常是異戊酸血癥發生的直接原因[Tanaka?K.，Ikeda?et?al.，1987，Enzyme，38：91-107]。

酰基脫氫酶蛋白家族的成員均含有兩個保守的序列片段，第一個位于酶的中心區域，第二個在蛋白C末端區域。這兩個序列片段分別為序列1：[GAC]-[LIVM]-[ST]-E-X(2)-[GSAN]-G-[ST]-D-X(2)-[GSA]及序列2：[QDE]-X(2)-G-[GS]-X-G-[LIVMFY]-X(2)-[DEN]-X(4)-[KR]-X(3)-[DEN]。所有的該家族的成員均含有這兩個保守的序列片段，其中保守序列1可能為蛋白發揮正常生理學功能的中心區域。酰基脫氫酶在生物體內調節著呼吸鏈的作用，其表達異常呼吸鏈就不能正常地提供生物體能量代謝所需的能量，從而直接影響各種與呼吸鏈相關的代謝反應，引發各種與能量代謝相關的代謝紊亂性疾病。酰基輔酶A脫氫酶為蛋白發揮生物學功能提供所需的能量及穩定蛋白在生物體內的結構，協助蛋白完成其正常的生理學功能。其表達異常將直接導致一些蛋白的異常表達及功能異常，從而引發各種相關的疾病。

本發明的新的酰基輔酶A脫氫酶12.56亦含有如上所述的酰基脫氫酶家族的兩個保守的序列片段，其為人酰基脫氫酶家族的新成員，且與該家族的其他成員相似，具有相似的生物學功能，在生物體內與各種能量代謝相關的代謝紊亂癥的發生有關。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與酰基輔酶A脫氫酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為酰基輔酶A脫氫酶12.65。

由于如上所述酰基輔酶A脫氫酶12.65蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的酰基輔酶A脫氫酶12.65蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新酰基輔酶A脫氫酶12.65蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——酰基輔酶A脫氫酶12.65以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼酰基輔酶A脫氫酶12.65的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼酰基輔酶A脫氫酶12.65的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產酰基輔酶A脫氫酶12.65的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——酰基輔酶A脫氫酶12.65的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——酰基輔酶A脫氫酶12.65的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與酰基輔酶A脫氫酶12.65異常相關的疾病的方法。