[發(fā)明專利]一種新的多肽——組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00136303.4
• 申請(qǐng)日: 2000-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN1361260A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶超家族根據(jù)不同的底物有許多成員，其中膽堿O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChoAcTase)，肉毒堿O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(COT)，過氧化物酶體肉毒堿辛酰轉(zhuǎn)移酶(PCOT)，線粒體肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶等由于序列的相似性成為一家族成員。其多處相似序列區(qū)域中最顯著的兩處為：一，近氨基末端存在三個(gè)[LIVM]-P二肽。二，序列中段有一系列帶電氨基酸殘基，組氨酸很可能為催化中心。

膽堿O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChoAcTase)參與神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的生物合成，與某些膽堿神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，如Alzheimer病。研究發(fā)現(xiàn)豬和果蠅的ChoAcTase的cDNA只有30％的同源性，經(jīng)插間隔，可達(dá)70％。豬序列中有六個(gè)高保守區(qū)域：22-80，125-181，241-285，292-344，369-430，545-605，其中有六個(gè)絲/蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)，292-344為組氨酸所在。幾種不同種哺乳動(dòng)物的ChoAcTase具有共同的功能，而結(jié)構(gòu)很不相似，其mRNA的長度也有很大差異。

肉毒堿O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(COT)有三個(gè)成員：肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)，肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT)和肉毒堿辛酰轉(zhuǎn)移酶(COT)，相互間的結(jié)構(gòu)，免疫原性和催化底物都不同，而共同的motif：LPXLPXPXL不存在于其他任何乙酰轉(zhuǎn)移酶成員，為肉毒堿結(jié)合位點(diǎn)。CAT存在于線粒體和過氧化物酶體中，底物為短鏈乙酰基團(tuán)(C2-C4)，維持自由CoA和acety-CoA的相對(duì)平衡，廣泛存在于酵母和哺乳類的各種細(xì)胞中，其中棕色脂肪和心臟肌細(xì)胞中的含量最高；CPT只存在于線粒體中，主要作用于中、長鏈乙酰基團(tuán)(C2-C4)，促使胞漿長鏈脂肪乙酰輔酶A從線粒體內(nèi)膜到β氧化場(chǎng)所的轉(zhuǎn)運(yùn)；COT只存在于過氧化物酶體中，優(yōu)先底物為己酰輔酶A(hexanoyl-CoAs)，催化中鏈脂肪酸脫離乙酰輔酶A至肉毒堿，在中鏈乙酰輔酶A從過氧化物酶體到線粒體的運(yùn)輸過程中起作用。肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶參與外源脂肪酸的代謝，其在代謝上的重要意義的最好的證明是：共濟(jì)失調(diào)腦病患者的CAT明顯減少。由于膽堿O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChoAcTase)在神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的生物合成，與某些膽堿神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，如Alzheimer病；肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶參與外源脂肪酸的代謝，共濟(jì)失調(diào)腦病患者的CAT明顯減少，該基因的研究開發(fā)可應(yīng)用于脂肪代謝疾病和相關(guān)的腦神經(jīng)病變。

兩處相似序列區(qū)域中最顯著的兩處為：

一，近氨基末端存在三個(gè)[LIVM]-P二肽，保守序列為：[LI]-P-x-[LVP]-P-[IVTA]-P-x[LIVM]-x[DENQAS]-[ST]-[LIVM]-x(2)-[LY]。

二，序列中段有一系列帶電氨基酸殘基，組氨酸很可能為催化中心：R-[FYW]-x-[DA]-[KA]-x(0，1)-[LIVMFY]-x-[LIVMFY](2)-x-(3)-[DNS]-[GSA]-x(6)-[DE]-[HS]-x(3)-[DE]-[GA]。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67。

由于如上所述組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶21.67的抗體。