[發明專利]一種新的多肽——組蛋白乙酰轉移酶21.67和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00136303.4
• 申請日: 2000-12-26
• 公開（公告）號: CN1361260A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——組蛋白乙酰轉移酶21.67，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

組蛋白乙酰轉移酶超家族根據不同的底物有許多成員，其中膽堿O-乙酰轉移酶(ChoAcTase)，肉毒堿O-乙酰轉移酶(COT)，過氧化物酶體肉毒堿辛酰轉移酶(PCOT)，線粒體肉毒堿棕櫚酰轉移酶等由于序列的相似性成為一家族成員。其多處相似序列區域中最顯著的兩處為：一，近氨基末端存在三個[LIVM]-P二肽。二，序列中段有一系列帶電氨基酸殘基，組氨酸很可能為催化中心。

膽堿O-乙酰轉移酶(ChoAcTase)參與神經遞質乙酰膽堿的生物合成，與某些膽堿神經系統疾病有關，如Alzheimer病。研究發現豬和果蠅的ChoAcTase的cDNA只有30％的同源性，經插間隔，可達70％。豬序列中有六個高保守區域：22-80，125-181，241-285，292-344，369-430，545-605，其中有六個絲/蘇氨酸磷酸化位點，292-344為組氨酸所在。幾種不同種哺乳動物的ChoAcTase具有共同的功能，而結構很不相似，其mRNA的長度也有很大差異。

肉毒堿O-乙酰轉移酶(COT)有三個成員：肉毒堿乙酰轉移酶(CAT)，肉毒堿棕櫚酰轉移酶(CPT)和肉毒堿辛酰轉移酶(COT)，相互間的結構，免疫原性和催化底物都不同，而共同的motif：LPXLPXPXL不存在于其他任何乙酰轉移酶成員，為肉毒堿結合位點。CAT存在于線粒體和過氧化物酶體中，底物為短鏈乙酰基團(C2-C4)，維持自由CoA和acety-CoA的相對平衡，廣泛存在于酵母和哺乳類的各種細胞中，其中棕色脂肪和心臟肌細胞中的含量最高；CPT只存在于線粒體中，主要作用于中、長鏈乙酰基團(C2-C4)，促使胞漿長鏈脂肪乙酰輔酶A從線粒體內膜到β氧化場所的轉運；COT只存在于過氧化物酶體中，優先底物為己酰輔酶A(hexanoyl-CoAs)，催化中鏈脂肪酸脫離乙酰輔酶A至肉毒堿，在中鏈乙酰輔酶A從過氧化物酶體到線粒體的運輸過程中起作用。肉毒堿乙酰轉移酶參與外源脂肪酸的代謝，其在代謝上的重要意義的最好的證明是：共濟失調腦病患者的CAT明顯減少。由于膽堿O-乙酰轉移酶(ChoAcTase)在神經遞質乙酰膽堿的生物合成，與某些膽堿神經系統疾病有關，如Alzheimer病；肉毒堿乙酰轉移酶參與外源脂肪酸的代謝，共濟失調腦病患者的CAT明顯減少，該基因的研究開發可應用于脂肪代謝疾病和相關的腦神經病變。

兩處相似序列區域中最顯著的兩處為：

一，近氨基末端存在三個[LIVM]-P二肽，保守序列為：[LI]-P-x-[LVP]-P-[IVTA]-P-x[LIVM]-x[DENQAS]-[ST]-[LIVM]-x(2)-[LY]。

二，序列中段有一系列帶電氨基酸殘基，組氨酸很可能為催化中心：R-[FYW]-x-[DA]-[KA]-x(0，1)-[LIVMFY]-x-[LIVMFY](2)-x-(3)-[DNS]-[GSA]-x(6)-[DE]-[HS]-x(3)-[DE]-[GA]。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與組蛋白乙酰轉移酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為組蛋白乙酰轉移酶21.67。

由于如上所述組蛋白乙酰轉移酶21.67蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的組蛋白乙酰轉移酶21.67蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新組蛋白乙酰轉移酶21.67蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——組蛋白乙酰轉移酶21.67以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼組蛋白乙酰轉移酶21.67的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼組蛋白乙酰轉移酶21.67的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產組蛋白乙酰轉移酶21.67的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——組蛋白乙酰轉移酶21.67的抗體。