[發(fā)明專利]一種新的多肽——人NADH脫氫酶亞單位I－14.08和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00135945.2
• 申請(qǐng)日: 2000-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN1361153A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人NADH脫氫酶亞單位I-14.08，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

呼吸鏈NADH脫氫酶(也稱之為復(fù)合物I或NADH-輔酶Q氧化還原酶)是一種多聚酶復(fù)合物，存在于線粒體內(nèi)膜、葉綠體及藍(lán)細(xì)菌中。在藍(lán)細(xì)菌中，其又被作為一種NADH-質(zhì)體醌氧化還原酶。該酶復(fù)合物由25-30個(gè)多聚肽鏈亞單位組成，其中有15個(gè)亞單位存在于膜上，而這15個(gè)亞單位中的7個(gè)在許多不同的物種中均由線粒體和葉綠體基因組編碼。由這些細(xì)胞器編碼的保守的亞單位被稱之為亞單位I(由線粒體中的ND1基因及葉綠體中的NDH1基因編碼)，其中含有輔酶Q結(jié)合位點(diǎn)[Weidner?U.，Geier?S.et?al.，1993，J?Mol?Biol，233：109-122]。

呼吸鏈NADH脫氫酶酶復(fù)合物的ND1亞單位與大腸桿菌甲酸脫氫酶的亞單位4及脫氫酶4的亞單位C有著高度的相似性。Paracoccus反硝化NQ08蛋白及大腸桿菌nuoH?NADH輔酶Q氧化還原酶亞單位亦為NADH脫氫酶亞單位I家族的成員。該蛋白家族的成員在生物體內(nèi)均參與各種呼吸鏈的反應(yīng)，作為電子傳遞的中間物，負(fù)責(zé)將電子傳遞給氧，生成氧離子，與2H⁺結(jié)合成H₂O。

眾所周知，呼吸鏈?zhǔn)巧矬w內(nèi)電子傳遞及能量轉(zhuǎn)換的重要方式，而呼吸鏈反應(yīng)過程中涉及各種不同酶的作用。這些不同的酶在呼吸鏈過程中協(xié)調(diào)作用以促進(jìn)呼吸代謝過程的完成。其中的任意一種物質(zhì)突變或表達(dá)異常都將導(dǎo)致呼吸鏈的作用異常。因而，NADH脫氫酶復(fù)合物作為呼吸鏈的重要組成部分亦在此過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，其表達(dá)異常將導(dǎo)致生物體內(nèi)呼吸鏈能量代謝的紊亂，從而引發(fā)各種相關(guān)的代謝紊亂癥。

除西瓜及利什曼原蟲屬的ND1亞單位不含有序列片段1及萊因哈德衣藻不含有序列片段2外，其余該酶亞單位家的成員均同時(shí)含有以上所述的兩個(gè)保守的序列片段。該兩個(gè)序列片段可能是酶復(fù)合物亞單位I的活性作用中心，其突變將導(dǎo)致亞單位的表達(dá)異常，不能與輔酶Q正常的結(jié)合，從而影響其在呼吸鏈中的作用。該蛋白家族的成員的表達(dá)異常通常與生物體內(nèi)各種與呼吸鏈相關(guān)的發(fā)育代謝紊亂癥、物質(zhì)代謝紊亂癥等疾病的發(fā)生相關(guān)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人NADH脫氫酶亞單位I的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人NADH脫氫酶亞單位I-14.08。

由于如上所述人NADH脫氫酶亞單位I-14.08蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人NADH脫氫酶亞單位I-14.08蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人NADH脫氫酶亞單位I-14.08蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人NADH脫氫酶亞單位I-14.08以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人NADH脫氫酶亞單位I-14.08的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人NADH脫氫酶亞單位I-14.08的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人NADH脫氫酶亞單位I-14.08的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人NADH脫氫酶亞單位I-14.08的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人NADH脫氫酶亞單位I-14.08的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人NADH脫氫酶亞單位I-14.08異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；