[發明專利]一種新的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.75和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00135919.3
• 申請日: 2000-12-26
• 公開（公告）號: CN1361139A
• 公開（公告）日: 2002-07-31
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.75，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。肝細胞能夠通過肝基底外側細胞從肝竇狀血小管攝取大量不同的親脂性組織陰離子如多種膽汁陰離子與甾族復合物，鈉離子依賴性與非鈉離子依賴性的轉運系統位于肝基底外側細胞質膜區域上，與?；撬?或甘氨酸)結合的膽酸通過鈉離子-?；悄懰釁f同轉運多肽(NTCP)優先地被肝細胞攝取，這在鼠與人肝細胞中均發現(Hagenbuch?B?et?al.，1991)。另一方面，肝細胞對非膽酸結合狀態的組織陰離子的攝取是通過非鈉離子依賴性的載體獨特性地進行，這些載體可能包括膽汁轉運激酶(37KD)、四溴酚酞磺酸鈉和膽紅素結合蛋白(55KD)、一種特殊的組織陰離子結合蛋白(55KD)(Tiribelli?C.，1990；Berk?PD?et?al.，1987；WolkoffAW?et?al.，1993)，此外已被克隆的鼠與人肝組織陰離子轉運多肽74亦進行非鈉離子依賴性的組織陰離子如四溴酚酞磺酸鹽、膽酸鹽、?；悄懰猁}、甘氨膽酸鹽、脫氧牛磺膽酸鹽等的轉運(Jacquemin?E?et?al.，1994)。

人肝組織陰離子轉運多肽(OATP)74基因由27110個核苷酸組成，含16個堿基對的聚腺苷酸尾，它的起始位點在第54個核苷酸處，其開放讀框序列延伸超過2010個核苷酸，編碼一個含670個氨基酸分子量為74KD的含8個潛在N-糖基化位點的蛋白。人肝組織陰離子轉運多肽74的序列提示蛋白含有10-12個跨膜區域、8個N-糖基化位點，其中的4個N-糖基化位點位于跨膜結構域9-12的大的親水嚕噗上(Kullak-Ublick?et?al.1995)。人肝組織陰離子轉運多肽74與鼠組織陰離子轉運多肽74非常密切，兩者有67％的同源性、82％的相似性，鼠組織陰離子轉運多肽74可能含有10個跨膜結構域、4個N-糖基化位點(JacqueminE?et?al.，1994)，兩者很可能均屬組織陰離子轉運多肽基因家族(Kullak-Ublicket?al.1995)。

以人肝OATP互補RNA為探針，Northern雜交分析顯示來自人肝臟、腦、肺、腎、睪丸的mRNA的交叉激活。進一步的研究顯示高強度的雜交信號在人腦全mRNA、肝臟mRNA、腎mRNA中出現，并且一些數據提示人OATP在許多組織中以多種形式出現，主要表現為分子量的大小。人OATP在人體總的組織陰離子轉運上起著重要作用。人肝OATP在肝外多種組織的存在暗示了總體上它在人體組織的陰離子跨上皮運輸中的重要作用(Kullak-Ublick?et?al.，1995)。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人組織陰離子轉運多肽的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人組織陰離子轉運多肽13.75。

由于如上所述人組織陰離子轉運多肽13.75蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人組織陰離子轉運多肽13.75蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人組織陰離子轉運多肽13.75蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.75以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽13.75的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人組織陰離子轉運多肽13.75的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人組織陰離子轉運多肽13.75的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人組織陰離子轉運多肽13.75的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人組織陰離子轉運多肽13.75的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人組織陰離子轉運多肽13.75異常相關的疾病的方法。