[發明專利]一種新的多肽——人加雙氧酶12.43和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00135159.1
• 申請日: 2000-12-20
• 公開（公告）號: CN1360033A
• 公開（公告）日: 2002-07-24
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人加雙氧酶12.43，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

細菌環的羥基化加雙氧酶是多成分的酶復合體，它由一個羥化酶成分和一個電子轉移成分構成。羥化酶成分本身包含兩個亞單元：一個50Kd的α-亞單元；一個20Kd的β-亞單元。電子轉移成分本身也包含兩個亞單元：一個鐵氧還蛋白亞單元和一個鐵氧還蛋白還原酶亞單元，或者是單獨一個具有鐵氧還蛋白以及鐵氧還蛋白還原酶兩種截然不同功能的亞單元。

這些加雙氧酶含有一個芳香環羥化酶成分，羥化酶有兩個亞單元，這兩個亞單元在不同的加雙氧酶中都很類似。羥化酶成分中α-亞單元既結合了一個2Fe-2S型的鐵硫蛋白，又結合了一個鐵原子，而β-亞單元沒有包含任何可探測到的鐵原子或不穩定的硫化合物(Neidle?E.L.，Hartnett?C.，Ornston?N.L.，Bairoch?A.，Rekik?M.，Harayama?S.1991?J.Bacteriol.173：5385-5395)。在α-亞單元蛋白的N末端有一個含24個氨基酸殘基的保守區域，該區域含有能結合鐵硫蛋白的2個半胱氨酸和2個組氨酸殘基。我們把該區域作為一個信號模式。

保守序列為：C-x-H-R-[GA]-x(8)-G-N-x(5)-C-x-[FY]-H

??????其中，2個C和2個H被認為是[2Fe-2S]的配位體。

加雙氧酶的電子轉移成分N末端區域類似于葉綠體型黃素蛋白，而C末端區域類似于幾個氧化還原酶。電子轉移成分中有一個單獨的鐵硫黃素蛋白，具有NADH-細胞色素c的還原活性，使電子從NADH轉移到芳香環上，并使之羥化。

本次發現的加雙氧酶中芳香環羥化酶α-亞單元上的保守序列，有助于進一步揭示黃素類輔酶的作用機制，以及金屬離子例如Fe(II)和金屬-硫簇在反應中的催化性作用。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人加雙氧酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人加雙氧酶12.43。

由于如上所述人加雙氧酶12.43蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人加雙氧酶12.43蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人加雙氧酶12.43蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人加雙氧酶12.43以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人加雙氧酶12.43的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人加雙氧酶12.43的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人加雙氧酶12.43的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人加雙氧酶12.43的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人加雙氧酶12.43的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人加雙氧酶12.43異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中769-1110位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1529位的序列。