[發(fā)明專利]一種新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00135121.4
• 申請(qǐng)日: 2000-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN1360028A
• 公開（公告）日: 2002-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/00
• 分類號(hào): C12N9/00;C12N9/90;C12N15/52;C12N15/61;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/533;C12Q1/68;A61K38/43;A61K38/52
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在生物體內(nèi)，染色體的濃縮、染色單體的分開有著非常重要的作用，還能夠釋放由于DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制而產(chǎn)生的扭轉(zhuǎn)應(yīng)力(Roca，1995)。II型拓?fù)洚悩?gòu)酶的催化活性包括該酶與雙鏈DNA的共價(jià)結(jié)合，并且伴隨著DNA卵裂形成一個(gè)瞬時(shí)裂開的混合物。然后這種酶能夠結(jié)合ATP，使之構(gòu)象發(fā)生改變以便于一個(gè)二級(jí)DNA雙螺旋穿過開裂著的混合物。緊接著發(fā)生ATP的水解和DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的重新封閉。

在鳥類和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，存在兩種異構(gòu)形式的拓?fù)洚悩?gòu)酶，分別是topo?IIα(TOP2A)和topo?IIβ(TOP2B)(Chung?et?al.，1989)。而在非脊椎動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，只有單一形式的拓?fù)洚悩?gòu)酶。TOP2A位于染色體17q21-22，TOP2B位于染色體3p24(Tsai-Pflugfelder?et?al.，1988；Jenkins?et?al.，1992)。兩種異構(gòu)體在真核的有機(jī)體中高的進(jìn)化程度表明了它們發(fā)揮著各不相同的生理學(xué)功能，它們?cè)谝恍┥锘瘜W(xué)和藥理學(xué)特性上有所不同(Mirski?and?Cole，1997；Austinand?Marsh，1998)。它們的表達(dá)水平在不同的組織、不同的生長階段以及整個(gè)細(xì)胞周期上都有較大程度的不同(Capranico?et?al.，1992)。

對(duì)TOP2A和TOP2B基因進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)TOP2A的全長序列比TOP2B有更大的分歧，表明TOP2B基因有更強(qiáng)的選擇性。TOP2B基因含有36個(gè)外顯子，其分子量大于49Kb，比TOP2A多了一個(gè)外顯子(Shapiro?and?Senapathy，1987)。內(nèi)在外顯子長度從44到232bp不同，平均的內(nèi)在外顯子長度是135bp，TOP2A與TOP2B相似。

TOP2A和TOP2B兩種基因的的蛋白產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著較為重要的作用，它們可以作為一些廣泛用于治療人類癌癥的藥物的細(xì)胞內(nèi)靶子，接受這些藥物并與它們結(jié)合，使它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能。

本發(fā)明的人的基因與人拓?fù)洚悩?gòu)酶II?alpha-4基因在蛋白水平上有69％的同一性和77％的相似性。且兩者均含有拓?fù)洚悩?gòu)酶家族的特征性結(jié)構(gòu)域?；谝陨细鼽c(diǎn)，故認(rèn)為本發(fā)明的新基因?yàn)橥負(fù)洚悩?gòu)酶基因，命名為{人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99}。并以此推斷其與人拓?fù)洚悩?gòu)酶II?alpha-4相似，同為拓?fù)洚悩?gòu)酶家族的成員，并具有相似的生物學(xué)功能。

由于如上所述人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人拓?fù)洚悩?gòu)酶11.99異常相關(guān)的疾病的方法。

?本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。