[發(fā)明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白14.74和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00135116.8
• 申請日: 2000-12-20
• 公開（公告）號: CN1359922A
• 公開（公告）日: 2002-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白14.74，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

真核基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控對于基因的正常表達是十分重要的，通常由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子來完成這一過程，它們在生物體內(nèi)參與決定基因在何種組織及何種發(fā)育階段開始轉(zhuǎn)錄。編碼這類蛋白的基因如發(fā)生突變，不但該基因自身不能正常表達，而且受其調(diào)節(jié)的許多基因也不能正常的進行轉(zhuǎn)錄與表達。轉(zhuǎn)錄因子對基因表達的調(diào)控主要通過轉(zhuǎn)錄因子與特定的DNA序列結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用及轉(zhuǎn)錄因子與常規(guī)轉(zhuǎn)錄機構(gòu)的相互作用在完成。根據(jù)結(jié)構(gòu)基序的不同，已知的DNA結(jié)合蛋白可主要分為兩類：含有螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序的蛋白及鋅指蛋白[KamalChowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，Nucleic?Acids?Research，1988，16：9995-10011]。

鋅指蛋白為編碼鋅離子介導(dǎo)的核苷酸結(jié)合蛋白多基因家族中的成員。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種鋅指蛋白。所有的鋅指蛋白均含有28-30個氨基酸長的保守的指重復(fù)序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個拷貝，其拷貝數(shù)不同則功能也不同。鋅指蛋白與不同長度的DNA的結(jié)合依賴于指結(jié)構(gòu)的數(shù)量，多指結(jié)構(gòu)可能與復(fù)合物的結(jié)合穩(wěn)定性有關(guān)，而復(fù)合物是RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的作用位點。研究發(fā)現(xiàn)，許多鋅指蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)域相互連接區(qū)域也是高度保守的，這一區(qū)域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中組氨酸與半胱氨酸為金屬離子的結(jié)合位點，X為可變的[Jeremy?M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

鋅指蛋白KRAB亞家族的成員在其氨基酸序列的N末端均含有一KRAB(Kruppel-associated?box)結(jié)構(gòu)域。在人基因組中已被確定含有300-700個鋅指蛋白，其中所有Kruppel相關(guān)的基因中約有三分之一的基因含有這一結(jié)構(gòu)域，即為該亞家族中的成員。KRAB結(jié)構(gòu)域為一由75個氨基酸組成的鋅指蛋白N末端DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，在進化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。該結(jié)構(gòu)域被分為A、B兩個盒結(jié)構(gòu)，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時含有KRAB?A-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發(fā)現(xiàn)，KRAB結(jié)構(gòu)域為一潛在的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域，其中由45個氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉(zhuǎn)錄抑制所必須的，螺旋結(jié)構(gòu)中氨基酸的替換將減弱蛋白對轉(zhuǎn)錄的抑制功能，從而導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄表達的失調(diào)及引發(fā)各種發(fā)育及惡性紊亂相關(guān)的疾病。A盒結(jié)構(gòu)的以致活性相對弱一些。[N.Tommerup?et?al.，Genomics，1995，27：259-264]。

本發(fā)明的人的基因與人鋅指蛋白136在蛋白水平上有53％的同一性和67％的相似性。且兩者相似，其氨基酸序列的N末端含有鋅指蛋白KRAB亞家族的特征性結(jié)構(gòu)域---KRAB結(jié)構(gòu)域A盒結(jié)構(gòu)；C末端則含有鋅指蛋白家族的特征性結(jié)構(gòu)域---C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域。基于以上各點，故認為本發(fā)明的新基因為人鋅指蛋白KRAB亞家族的新成員，命名為人鋅指蛋白44。并以此推斷其與人鋅指蛋白136及人鋅指蛋白KRAB亞家族的其他成員相似，具有相似的生物學(xué)功能。其在生物體內(nèi)與正常及異常細胞的分化及增殖均相關(guān)[Vissing?H.，Meyer?WK?et?al.，1995，F(xiàn)EBSLett，369：153-157]。而其KRAB結(jié)構(gòu)域A盒為一弱的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域，可有效地控制蛋白的轉(zhuǎn)錄表達量，該結(jié)構(gòu)基序的突變，可能會引起一些蛋白的異常增殖，從而引發(fā)一些相關(guān)的惡性疾病。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達譜與人鋅指蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人鋅指蛋白14.74。