[發(fā)明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白11.88和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00135106.0
• 申請(qǐng)日: 2000-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN1359917A
• 公開（公告）日: 2002-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白11.88，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

真核基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控對(duì)于基因的正常表達(dá)及發(fā)揮生物學(xué)功能是十分重要的，通常由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子來(lái)完成這一過程。轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子在生物體內(nèi)參與決定基因在何種組織及何種發(fā)育階段開始轉(zhuǎn)錄，編碼這類蛋白的基因如發(fā)生突變，不但該基因自身不能正常表達(dá)，而且受其調(diào)節(jié)的許多基因也不能正常的進(jìn)行轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控主要通過轉(zhuǎn)錄因子與特定的DNA序列結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用及轉(zhuǎn)錄因子與常規(guī)轉(zhuǎn)錄機(jī)構(gòu)的相互作用在完成。根據(jù)結(jié)構(gòu)基序的不同，已知的DNA結(jié)合蛋白可主要分為兩類：含有螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序的蛋白及鋅指蛋白[Kamal?Chowdhury，Heidi?Rohdewohld?et?al.，NucleicAcids?Research，1988，16：9995-10011]。

鋅指蛋白為編碼鋅離子介導(dǎo)的核苷酸結(jié)合蛋白多基因家族中的成員，鋅指蛋白按其結(jié)構(gòu)特征又可分為各種不同的家族。人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種類型的鋅指蛋白。果蠅Kruppel基因類似的鋅指蛋白分布最為廣泛，且在生物體內(nèi)有著重要的生物學(xué)功能。這些基因均含有鋅指蛋白的特征性連續(xù)重復(fù)的C2-H2鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域。研究發(fā)現(xiàn)，這些蛋白與基因的轉(zhuǎn)錄活化及抑制有關(guān)，這些蛋白的表達(dá)異常將引發(fā)各種發(fā)育紊亂性疾病、各種腫瘤的發(fā)生、各種遺傳性疾病及免疫系統(tǒng)疾病[Kamal?Chowdhury，HeidiRohdewohld?et?al.，Nucleic?Acids?Research，1988，16：9995-10011]。

所有的鋅指蛋白Kruppel家族的成員均含有28-30個(gè)氨基酸長(zhǎng)的保守的指重復(fù)序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點(diǎn)為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個(gè)拷貝，其拷貝數(shù)不同(鋅指?jìng)€(gè)數(shù)不同)則功能也不同。鋅指蛋白與不同長(zhǎng)度的DNA的結(jié)合依賴于指結(jié)構(gòu)的數(shù)量，多指結(jié)構(gòu)可能與復(fù)合物的結(jié)合穩(wěn)定性有關(guān)，而復(fù)合物是RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的作用位點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，許多鋅指蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)域相互連接區(qū)域也是高度保守的，這一區(qū)域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中組氨酸與半胱氨酸為金屬離子的結(jié)合位點(diǎn)，而X為可變氨基酸殘基。這一區(qū)域?qū)τ阡\指結(jié)構(gòu)的形成是必需的，指結(jié)構(gòu)的數(shù)量將直接影響鋅指蛋白與不同長(zhǎng)度的DNA結(jié)合，且多指結(jié)構(gòu)與復(fù)合物的結(jié)合穩(wěn)定性有關(guān)[Jeremy?M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

1991年，Rosati?M等人克隆得到了多個(gè)人結(jié)構(gòu)相關(guān)的鋅指蛋白亞家族的成員，該亞家族的成員的C末端均含有一Kruppel型鋅指基序，且其N末端含有兩個(gè)保守的氨基酸模式，即FPB-A及FPB-B。其中，F(xiàn)PB-B在所有的家族成員中均存在，而FPB-A在有些成員中存在，在有些成員中不存在。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)模式是在前體mRNA的選擇性剪切過程中形成的[Rosati?M.，Marino?M?et?al.，1991，Nucleic?Acids?Res，19：5661-5667]。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人鋅指蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人鋅指蛋白11.88。

由于如上所述人鋅指蛋白11.88蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白11.88蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白11.88蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人鋅指蛋白11.88以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人鋅指蛋白11.88的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人鋅指蛋白11.88的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人鋅指蛋白11.88的方法。