[發(fā)明專利]凋亡抑制因子API4基因?yàn)榘袠?biāo)的反義寡核苷酸結(jié)構(gòu)和用途

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00134535.4
• 申請(qǐng)日: 2000-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN1358857A
• 公開（公告）日: 2002-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王升啟;林莉;管偉;王小紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C07H21/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及反義寡核苷酸的結(jié)構(gòu)及其用途，具體地說涉及凋亡抑制因子基因靶標(biāo)的反義寡核苷酸的結(jié)構(gòu)和用途。

腫瘤分子生物學(xué)研究表明，腫瘤是由于基因異常引起的疾病。致病機(jī)理包括癌基因的激活和抑癌基因的失活以及細(xì)胞周期的異常。腫瘤發(fā)病分子機(jī)理的進(jìn)一步闡明為腫瘤的基因治療提供了可靠的理論依據(jù)。近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)是腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞周期，細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系。反義技術(shù)是近十幾年興起的生物高技術(shù)，用反義技術(shù)封閉和抑制特定基因的表達(dá)是基因治療的重要組成部分。1978年Stephenson和Zamenick用互補(bǔ)寡聚核苷酸特異性抑制Rous肉瘤病毒的復(fù)制，首次提出了反義寡聚脫氧核糖核苷酸(ASODN)抑制基因表達(dá)的概念。ASODN是根據(jù)Watson-Crick堿基配對(duì)原理能夠與mRNA的堿基對(duì)互補(bǔ)阻止其翻譯成蛋白質(zhì)的DNA。反義寡核苷酸具有定向合理設(shè)計(jì)，體內(nèi)外作用高效和能人工大規(guī)模合成等藥用特性，因而近年來成為治療病毒感染，腫瘤，及其它由于基因表達(dá)異常引起的疾病的一類潛在型藥物，其中腫瘤相關(guān)基因可作為反義藥物作用的靶標(biāo)。

本發(fā)明的目的是根據(jù)腫瘤相關(guān)基因API4設(shè)計(jì)12條寡核苷酸序列(見表1)，采用PE公司產(chǎn)391A型DNA合成儀合成并采用硫代修飾，經(jīng)Micro?PureII反向柱(Solid?PhaseScience)純化后，以此產(chǎn)物作為腫瘤的治療藥物。

????????????????表1??反義寡核苷酸序列及性質(zhì)序號(hào)?????????靶位(nt)????長(zhǎng)度(nt)???特性??????序列(5’-3’)1????????????644-663???????20????????A????GCAGAAGCACCTCTGGTGCC2????????????748-767???????20????????A????TTCTCACCTGGTAAGCCCGG3????????????916-935???????20????????A????GATAAGGAACCTGCAGCTCA4????????????1002-1021?????20????????A????CACACAAGTCATGCATCTAC5????????????1403-1422?????20????????A????CCGTGTGGAGAACGTGACAG6????????????12-31?????????20????????A????GCCAACGGGTCCCGCGATTC7????????????33-52?????????20????????A????CATGCCGCCGCCGCCACCTC8????????????38-57?????????20????????A????GCACCCATGCCGCCGCCGCC9????????????46-65?????????20????????A????AACGTCGGGGCACCCATGCC10???????????36-55?????????20????????A????ACCCATGCCGCCGCCGCCAC11???????????29-48?????????20????????A????CCGCCGCCGCCACCTCTGCC12???????????42-61?????????20????????A????CGGGGCACCCATGCCGCCGC

本發(fā)明的主要內(nèi)容是：選取了API4基因作為靶標(biāo)進(jìn)行抗腫瘤反義寡核苷酸的篩選和評(píng)價(jià)，API4是凋亡抑制因子(IAP)，IAP抑制細(xì)胞凋亡可調(diào)節(jié)組織分化，促進(jìn)突變發(fā)生和產(chǎn)生治療抗性而促進(jìn)新生物中細(xì)胞的異常增殖導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。API4在胚胎發(fā)育中起作用，在成熟發(fā)育的組織中則不出現(xiàn)，而在最終發(fā)展成腫瘤的轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)。人類許多腫瘤如肺癌，結(jié)腸癌，胰腺癌，前列腺癌，乳癌及50％的淋巴瘤均可出現(xiàn)較高表達(dá)。

在針對(duì)API4基因的12條反義寡核苷酸中，10#的體外抑制細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)且具有持續(xù)性，在用藥后的4天內(nèi)細(xì)胞增殖抑制率持續(xù)上升，第四天抑制率達(dá)到97％的峰值，至第5天開始緩慢下降，第六天降至82.4％。10#序列的二級(jí)結(jié)構(gòu)由內(nèi)環(huán)-莖-內(nèi)環(huán)-莖-膨脹環(huán)-莖-發(fā)夾部組成(A＝3，T＝1，C＝12，G＝4)。