[發(fā)明專利]控制水稻花粉育性的基因及其使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00130144.6
• 申請日: 2000-10-17
• 公開（公告）號: CN1348962A
• 公開（公告）日: 2002-05-15
• 發(fā)明（設計）人: 米志勇;吳乃虎
• 申請（專利權）人: 中國科學院發(fā)育生物學研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;A01H1/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 胡交宇

1.一種控制水稻花粉育性的蛋白質，其氨基酸序列如下：

MSASRFIKCVTVGDGAVGKTCMLISYTSNTFPTDYV

PTVFDNFSANVVVDGSTVNLGLWDTAGQEDYNRL

RPLSYRGADVFLLAFSLISKASYENVSKKWIPELRH

YAPGVPIILVGTKLDLRDDKQFFVDHPGAVPISTAQG

EELRKLIGAAAYIECSSKTQQNIKAVFDAAIKVVLQP

PKQKKKKKKAQKGCAIL^*

2.一種編碼權利要求1所述的蛋白質的基因。

3.按照權利要求2所述的基因，它具有如下所示的核苷酸序列：

AGCAAGCAGC?AGCTGAGGTG?AGGTCCGTGG?CGTTGGAGTG?AGGACTGAGG?AGGAAGAAGA?????60

GGGCGGGATC?TAGGGTACCG?GATGCGCTGG?CTGTGCTGAG?TGAGAGTAGA?GATGAGCGCG????120

TCTCGGTTCA?TCAAGTGCGT?CACCGTGGGG?GACGGCGCCG?TGGGCAAGAC?CTGCATGCTC????180

ATCTCCTACA?CCTCCAACAC?CTTCCCCACG?GACTATGTTC?CAACTGTTTT?TGATAACTTC????240

AGTGCAAATG?TTGTGGTCGA?TGGGAGCACT?GTGAACTTGG?GGTTGTGGGA?TACAGCAGGA????300

CAAGAGGACT?ACAATAGGCT?ACGCCCGTTG?AGCTATCGTG?GCGCTGATGT?TTTCCTGCTG????360

GCCTTTTCTC?TGATCAGCAA?AGCAAGCTAT?GAGAATGTTT?CTAAAAAGTG?GATACCTGAA????420

TTAAGGCATT?ATGCTCCTGG?TGTGCCAATA?ATTCTCGTTG?GAACAAAGCT?TGATCTGCGG????480

GATGATAAGC?AATTTTTCGT?AGATCACCCT?GGTGCTGTAC?CTATTTCCAC?TGCTCAGGGC????540

GAAGAGCTGA?GGAAACTCAT?TGGTGCAGCG?GCATACATTG?AATGCAGTTC?AAAAACACAG????600

CAAAACATCA?AGGCAGTTTT?CGATGCTGCG?ATTAAGGTGG?TTCTCCAGCC?TCCAAAGCAA????660

AAGAAGAAGA?AGAAAAAGGC?GCAGAAAGGA?TGTGCCATCT?TGTAATTAAA?TGGTAGACAG????720

TGCAGTGCAG?ATCGATGTAT?CCCTTCATTT?GTAGCCTCTG?GCTTCAATCG?TCGCTTGTTT????780

GTATAATTAC?GCTAGATGCC?ACCGGCAGAA?GATATAATAT?AGTCCTCCTG?CCTTTGTGGT????840

GTTGGTCTCT???????????????????????????????????????????????????????????850

4.一種通過反義mRNA表達法阻斷水稻中控制水稻花粉育性的基因的正常表達，改變水稻育性的方法，該方法包括：

a.反向選取權利要求2或3中所述的水稻osRACD基因中連續(xù)長度在200bp至基因全長的任意區(qū)段序列，將其與花粉組織特異型啟動子和真核生物表達載體連接構建重組反義表達質粒；

b.利用農桿菌侵染轉化的方法轉化水稻愈傷組織，培養(yǎng)轉化后的愈傷組織，獲得轉基因表達植株，其花粉具有天然敗育的特性。

5.一種通過抑制控制水稻花粉育性的基因編碼的蛋白質在水稻中的活性，改變水稻育性的方法，該方法包括：

a.在原核生物表達系統(tǒng)中表達權利要求1中所述的osRACD蛋白質，并純化該osRACD蛋白質；

b.將純化的osRACD蛋白質對一種動物免疫獲得其單克隆抗體；

c.對該抗體進行蛋白質序列測定，人工合成該抗體的編碼基因核苷酸序列；

d.將該合成序列與含有花粉組織特異性表達啟動子的真核生物表達載體連接構建重組表達質粒；

e.通過農桿菌轉化方法，轉化水稻愈傷組織，培養(yǎng)轉化后的愈傷組織，獲得轉基因花粉敗育的水稻。