[發明專利]可表達外源性基因的人神經干細胞及其制備方法

無效

• 申請號: 00127979.3
• 申請日: 2000-12-22
• 公開（公告）號: CN1299867A
• 公開（公告）日: 2001-06-20
• 發明（設計）人: 朱劍虹
• 申請（專利權）人: 復旦大學醫學院附屬華山醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 上海醫科大學專利事務所
• 代理人: 吳桂琴

1、一種可表達外源性基因的人神經干細胞，其特征在于由人胚神經細胞為原始細胞分離克隆出人神經干細胞；采重組腺病毒相關病毒為載體，將外源性基因轉移入內制成。

2、按權利要求1所述的可表達外源性基因的人神經干細胞，其特征在于所述的分離克隆出的人神經干細胞為FZ-B9和FZ-B7。

3、按權利要求1所述的可表達外源性基因的人神經干細胞，其特征在于所述的外源性基因為標記性基因LacZ基因和治療性基因膠質細胞起源的神經營養因子基因。

4、一種可表達外源性基因的人神經干細胞的制備方法，包括下述步驟：(1)產生和培養神經干細胞

取7周和9周的流產胚胎組織，無菌收集，分離前腦組織，制備細胞混合液，加入DMEM/F12/N2培養液；(2)Hoechst33342四步驟法分離和克隆A.分離球體樣形態細胞至DMEM/F12/N2培養液中；B.加堿性纖維母細胞生長因子和人表皮生長因子入培養液；C.使用Hoechst33342進行熒光流式細胞分離邊際細胞；D.采用有限稀釋單細胞克隆化；(3)重組腺病毒相關病毒介導基因轉移。

5、按權利要求4所述的可表達外源性基因的人神經干細胞的制備方法，其特征在于所述的DMEM/F12/N2培養液含如下成分：

人胰島素25ng/ml

人轉鐵蛋白100μg/ml

人前列腺素20nM

谷氨酰胺2nM

葡萄糖6％

丁二胺60μM

氯化硒30nM

碳酸氫鈉3μM

HEPES?5mM

肝素2μg/ml