[發(fā)明專利]一種新的多肽——絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127893.2
• 申請日: 2000-12-13
• 公開（公告）號: CN1358851A
• 公開（公告）日: 2002-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白質(zhì)磷酸化依賴于細(xì)胞之間的互相通訊聯(lián)系。由于細(xì)胞間存在著精細(xì)的分工，一些細(xì)胞群體有賴于其他細(xì)胞群體，并要求其他的細(xì)胞群體產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。這種精巧的細(xì)胞間通訊網(wǎng)絡(luò)可以控制細(xì)胞的生長、分裂、死亡、分化形成組織以及各種生命過程。

細(xì)胞間以3種方式進(jìn)行通訊：(1)細(xì)胞通過分泌化學(xué)信號進(jìn)行相互通訊；(2)細(xì)胞直接接觸，通過與質(zhì)膜結(jié)合的信號分子影響其他細(xì)胞；(3)細(xì)胞間形成縫隙連接使細(xì)胞質(zhì)相互溝通，通過交換小分子來調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)。

信號傳導(dǎo)是將細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)換為細(xì)胞內(nèi)信使的過程。親水性信號分子包括神經(jīng)遞質(zhì)、生長因子、細(xì)胞因子、局部化學(xué)遞質(zhì)和大多數(shù)激素，它們不能穿過質(zhì)膜，只能與細(xì)胞表面的受體結(jié)合形成配體受體復(fù)合物進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制和受體蛋白的類型，細(xì)胞表面受體可分為3種：(1)離子通道耦聯(lián)的受體；(2)連接酶的表面受體；(3)與G蛋白耦聯(lián)的受體。

蛋白質(zhì)磷酸化是真核生物細(xì)胞調(diào)控中一個基本調(diào)控機(jī)制，同時也是最普通的蛋白質(zhì)修飾方式。例如，細(xì)胞分裂，細(xì)胞新陳代謝，細(xì)胞粘連和細(xì)胞遷移，細(xì)胞間通訊以及信號傳導(dǎo)等細(xì)胞活動都出現(xiàn)了蛋白質(zhì)磷酸化。為了完成這些功能，人類編碼基因中有2％-4％的基因編碼大約2000種不同的激酶。(Hunter，1996)

絲/蘇氨酸蛋白激酶是一類可以使其作用底物上的絲/蘇氨酸殘基磷酸化的蛋白激酶，在絲/蘇氨酸蛋白激酶活化后向下游傳遞信號的過程中包括了很多絲/蘇氨酸殘基磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，從而調(diào)控很多基因的表達(dá)。

絲/蘇氨酸蛋白激酶分為很多種類，如PKC，PKU等。但是它們在結(jié)構(gòu)上類似，都可以活化MAP激酶的激酶(MAPKK)，絲/蘇氨酸蛋白激酶被證明可以與MAPKK相互作用，MAPKK的結(jié)合功能域被證明存在于離絲/蘇氨酸蛋白激酶上，絲/蘇氨酸蛋白激酶具體的結(jié)構(gòu)請參閱相關(guān)文獻(xiàn)。

絲/蘇氨酸蛋白激酶可以使MAP激酶的激酶(MAPKK)的絲/蘇氨酸殘基磷酸化，從而活化了MAPKK。MAPKK磷酸化MAPK的蘇氨酸和酪氨酸兩個殘基使之活化。這種雙特異性的磷酸化就保證了MAPK不被其他蛋白激酶磷酸化，一直保持鈍化狀態(tài)，直至MAPKK活化后才能使MAPK活化，所以MAPKK唯一的底物就是MAPK。活化后的MAPK進(jìn)入細(xì)胞核，通過磷酸化其他激酶或基因調(diào)節(jié)蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)的絲/蘇氨酸殘基來活化它們，向下游傳遞信號，調(diào)節(jié)一些基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，比如，jun和Elk-1或一些蛋白激酶和其他蛋白質(zhì)。

雖然對絲/蘇氨酸蛋白激酶的結(jié)構(gòu)和功能的具體研究還待進(jìn)一步完成，但我們可以肯定的是作為一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，在Ras和PKC等活化的絲/蘇氨酸磷酸化的級聯(lián)反應(yīng)中有重要的作用，間接的，絲/蘇氨酸蛋白激酶對于信號傳導(dǎo)過程有不可忽略的作用，它可以調(diào)控細(xì)胞的生長、分裂、死亡、分化形成組織以及各種生命過程。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54。

由于如上所述絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶12.54的抗體。