[發明專利]一種石蒜凝集素蛋白及其編碼序列

無效

• 申請號: 00127700.6
• 申請日: 2000-12-04
• 公開（公告）號: CN1299870A
• 公開（公告）日: 2001-06-20
• 發明（設計）人: 唐克軒;姚劍虹;孫小芬
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/29;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C07K14/415;C07K16/16;C07K19/00;C12P21/02;C12Q1/68
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 陸飛

本發明涉及分子生物學、酶學、生理學以及基因工程等領域。具體地，本發明涉及一種在石蒜中表達的l-Lectin(凝集素)蛋白及其核酸序列。本發明還涉及該蛋白和核酸序列的制備方法和用途。

近20年來凝集素在生物學方面的應用研究發展迅速，它最大的特點在于其能夠識別糖和糖類，每一種凝集素具有對某一種特殊的碳水化合物有專一結合的能力(Ann?Biochem,1981,50：207～231)。某些凝集素基因則具有較強的抗同翅目類昆蟲包括蚜蟲和飛虱功能(Entomol?Exp?Appl,1993,66：119～126；Transgenic?Res,1995,4：18～25；Entomol?Exp?Appl,1995,75：51～59)。

本發明中，我們在石蒜中克隆到雪花蓮g-Lectin凝集素(GNA)基因的同源基因l-Lectin。

在本發明被公布之前，尚未有任何公開或報道過本專利申請中提及的石蒜l-Lectin蛋白序列及其核酸序列。

本發明的第一目的就是提供一種新的石蒜基因l-Lectin，該基因是一個石蒜l-Lectin蛋白基因。

本發明的第二目的是提供一種新的石蒜蛋白l-Lectin。

本發明的第三目的是提供一種利用重組技術生產上述新的石蒜l-Lectin蛋白和核酸序列的方法。

本發明還提供了這種石蒜l-Lectin蛋白多肽和編碼序列的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，該分子包括：編碼具有石蒜l-Lectin蛋白質活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.3中從核苷酸第32-508位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.3中從核苷酸第32-508位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼具有SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ?ID?NO.3中從核苷酸第32-508位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離出的石蒜l-Lectin蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.4氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO.4序列的多肽。

在本發明的另一方面，還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。

在本發明的另一方面，還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞。在實例中該宿主細胞是煙草。

在本發明的另一方面，還提供了一種產生具有石蒜l-Lectin蛋白質活性的多肽的方法，其步驟如下：

(1)將編碼具有石蒜l-Lectin蛋白活性多肽的純化的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成石蒜l-Lectin蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.3中從核苷酸第32-508位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)將步驟(1)中的表達載體轉入宿主細胞，形成石蒜l-Lectin蛋白的重組細胞；

(3)在適合表達石蒜l-Lectin蛋白多肽的條件下，培養步驟(2)中的重組細胞；

(4)分離出具有石蒜l-Lectin蛋白活性的基本純的多肽。

較佳地，在該方法中使用的核酸序列具有SEQ?ID?NO.3中第32-508位的序列。

本發明還提供了與l-Lectin蛋白多肽特異性結合的抗體，它包括多克隆抗體和單克隆抗體。

在本發明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段己從天然狀態下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態下伴隨核酸的組份分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。