[發(fā)明專利]一種新的多肽——RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127652.2
• 申請日: 2000-12-01
• 公開（公告）號: CN1355298A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學;上海博道基因技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/43
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

RNA聚合酶是復雜的轉(zhuǎn)錄機構(gòu)的核心部分，與RNA基因的轉(zhuǎn)錄和復制有密切關(guān)系。原核生物中各類RNA都是由一種RNA聚合酶催化合成的，真核生物則不同，他們的轉(zhuǎn)錄性能已經(jīng)變得更加專門化了。真核生物至少含有4中依賴于DNA的RNA聚合酶，其中3種是細胞核酶，各負責合成異類RNA。RNA聚合酶I位于核仁內(nèi)，并合成大量的RNA前體，它們以后再被進一步加工成rRNA。RNA聚合酶I對于濃度高達1000μg/ml以上的α-鵝膏覃堿才產(chǎn)生抗抑制作用，而僅僅0.05μg/ml的α-鵝膏覃堿就能夠抑制50％的RNA聚合酶III。

純化的RNA聚合酶還沒有表現(xiàn)出在體外有選擇性轉(zhuǎn)錄DNA的能力，但是可以證明RNA聚合酶I、II和III的粗制品對限定的模板有選擇性轉(zhuǎn)錄的能力在有時為體內(nèi)所利用的已知部位起始。可能純化的酶更象是核心酶而不是全酶，因而要在體外得以選擇性結(jié)合和起始需要附加的組分。一些RNA聚合酶含有PB1亞基，PB1亞基首先在是流感病毒RNA聚合酶中發(fā)現(xiàn)的，流感病毒RNA聚合酶是一種多功能多亞基的酶，由三種濾過性毒菌P蛋白亞基組成，即PB1、PB2和PA。在RNA聚合酶PB1亞基上有兩個GTP結(jié)合位點，即靠近其氨末端的的位點I(在P1和P11b交界處)和靠近其羧末端的位點II(在P11c上面)，兩個結(jié)合位點的RNA依賴的RNA聚合酶位點位于結(jié)構(gòu)上不同的區(qū)域，但各自都比較保守，它們都與RNA合成底物、引物的結(jié)合以及產(chǎn)物的形成有極其密切的關(guān)系。

PB1在RNA聚合酶中作為催化亞基起作用，在沒有PB2和PA兩個亞基存在的時候，它也能夠獨立催化RNA的合成，在條件適宜的情況下它還能催化RNA在體外的合成。以流感病毒為例，當細胞受到病毒感染時，流感病毒RNA基因開始在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和復制，核蛋白(RNP)復合物(包括毒菌RNA、RNA聚合酶和核殼體蛋白)成為RNA合成的催化單位，促進整個轉(zhuǎn)錄復制進程的進行。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達譜與RNA聚合酶I的40KDa亞基的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35。

由于如上所述RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35蛋白在調(diào)節(jié)細胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與RNA聚合酶I的40KDa亞基9.35異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。