[發明專利]一種新的多肽——人蛋白磷酸酶2Aalpha亞基22.66和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127647.6
• 申請日: 2000-12-01
• 公開（公告）號: CN1355310A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/42;C12Q1/68;A61K38/46
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

蛋白酪氨酸磷酸化和去磷酸化是生物體內細胞信號傳導的一個重要機制，通常由蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸/絲氨酸磷酸酶來共同調控完成。研究發現，生物體內存在著兩類不同的蛋白酪氨酸磷酸酶：可溶性胞液酶和膜結合酶。這兩種磷酸酶在生物體內具有相似的功能，只是作用的位點不同[Jones?S.W.，EriksonR.L.et?al.，1989，J?Biol.Chem.，264：7747-7753]。蛋白酪氨酸激酶與蛋白酪氨酸磷酸酶在生物體內協同作用，蛋白酪氨酸激酶的失活將導致細胞信號傳導途徑的異常，即細胞的異常增殖與原癌基因的變形、惡化，而蛋白酪氨酸磷酸酶作為蛋白酪氨酸激酶的拮抗劑，是一種腫瘤抑制基因，抑制著該過程的進行。該磷酸酶的突變或失活將導致原癌基因的變形，即導致生物體內各種腫瘤及癌癥等疾病的發生。

根據底物選擇性，抑制物敏感性和對二價陽離子的依賴性可以將蛋白酪氨酸/絲氨酸磷酸酶分為幾種：PP1，PP2A，PP2B，PP2C。其中以PP2A研究最為深入。報道表明PP2A在許多不同的細胞生命過程中都發揮著重要的調節作用，因此，對PP2A的調控也顯得十分重要。現在已經知道的對PP2A的調控機制有兩種：1、PP2A的催化亞基PP2Ac對PP2A的轉錄后調控。體外試驗表明，近C端的酪氨酸磷酸化或者一個未定位的絲氨酸磷酸化會使催化活性降低。而C端的亮氨酸的羧甲基化使磷酸化酶的活性增高。2、PP2Ac與其他蛋白的共同作用調節PP2A的活性。

近來發現的蛋白磷酸酶2A?alpha亞基主要在腦的神經核以及肝臟中表達，另外在睪丸中也有發現(J.Cell?Sci.111，1331-1340)。還有證據表明蛋白磷酸酶2A?alpha亞基對微管蛋白的中性化和穩定都起到一定的調節作用(J.CellSci.111，1331-1340)。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66。

由于如上所述人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人蛋白磷酸酶2A?alpha亞基22.66異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。