[發明專利]一種新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127645.X
• 申請日: 2000-12-01
• 公開（公告）號: CN1355191A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

許多真核細胞表面蛋白通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定到細胞膜表面。不論在原生動物還是在哺乳動物中，GPI的核心結構是保守的(Thomas，J.R.，Dwek，R.A.，and?Rademacher，T.W.，1990；Cross，G.A.，1990)。許多蛋白如糖基轉移酶等是GPI錨定器的生物合成所必不可少的，人類細胞中的糖基磷脂酰肌醇聚糖F(PIG-F)也是其中之一。

PIG-F的全長cDNA含有一個917堿基的開放閱讀框，編碼一條219個氨基酸殘基的蛋白。PIG-F的5’非翻譯區域含有一個典型的翻譯起始一致性序列(Kozak，M.，1987)，但是其信號肽沒有典型的N末端疏水性序列。根據PIG-F的氨基酸序列可以推斷，該蛋白是非常疏水性的(包含了多于55％的疏水性殘基)，因此其大多數氨基酸殘基都包埋在細胞膜的內部。

由于其cDNA中沒有任何的DNA結合區域發現，推斷PIG-F可能直接參與GPI錨定器的生物合成過程，并且在七最后一個步驟中起作用。它還可能有乙醇胺磷酸酯(EthN-P)轉移酶活性，能夠催化乙醇胺磷酸酯向GPI中間態(存在三個甘露醇殘基)的轉移。另外，PIG-F還與烷化的磷脂酰肌醇(PI)的生物合成密切相關。

在人類造血細胞中，GPI錨定器生物合成的缺乏將導致一種溶血性疾病——陣發性夜間血紅蛋白尿(PNH)(Mahoney，J.F.，Urakaze，M.et?al，1992；Takahashi，M.，Takeda，J.et?al.，1993)。實驗證明，參與GPI錨定器生物合成早期過程的糖基磷脂酰肌醇聚糖A(PIG-A)(Miyata，T.，Takeda，J.，etal.，1993)的缺失就是造成PNH疾病的原因之一。事實上，GPI錨定器生物合成過程中任何一個步驟的缺失都將導致PNH疾病的發生，PIG-F當然也不例外(Inoue?N，Kinoshita?T，Orii?T，Takeda?J，1993)。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與糖基磷脂酰肌醇聚糖F的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21。

由于如上所述糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。?

本發明的另一個目的是提供含有編碼糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與糖基磷脂酰肌醇聚糖F12.21異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。