[發明專利]一種新的多肽——人RNA解螺旋酶12.54和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127639.5
• 申請日: 2000-12-01
• 公開（公告）號: CN1355308A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C12N9/14
• 分類號: C12N9/14;C12N15/55;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人RNA解螺旋酶12.54，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在細胞的眾多活動中，RNA結構的調控如：前體RNA的剪接、剪接體的裝配、蛋白翻譯等都是必需的調節步驟。這些過程通常由各種不同的RNA解螺旋酶來調節完成。RNA解螺旋酶為一很大的蛋白家族，在很多RNA起重要作用的生物系統中均可檢測到。它們廣泛地分布于從原核生物(包括病毒)到低等及高等生物的各組織器官中，參與細胞核及線粒體的分裂、RNA的編輯、rRNA的加工、轉錄起始、，細胞核mRNA的轉運及mRNA的降解等過程。RNA解螺旋酶被認為是細胞發育及分化過程中的重要因子，其中的一些還在病毒單鏈RNA的轉錄及復制過程中起作用[Arri?Eisen，John?C.Lucchesi，Bioessays，1998，20：634-641]。其在生物體內為癌癥、神經系統疾病及免疫系統疾病的診斷、預防及治療提供了有效的手段。

RNA解螺旋酶根據其結構上的特征分為不同的亞家族，亞家族I和亞家族II。所有的解螺旋酶均含有兩個Walker型NTP結合結構域---A結構域(或叫ATP酶A結構域)和B結構域(或稱ATP酶B結構域)。亞家族I中的成員含有保守的ATP酶A結構域：GXXXXGKT。后發現，有一些RNA解螺旋酶的ATP酶結構域A在一些氨基酸位點上有突變，其ATP酶A結構域的保守序列為：AXXGXGKT，因而將這些蛋白分為一類，即亞家族II。在亞家族II中，有部分蛋白在ATP酶結構域B中含有保守的DEAD盒，后發現該亞家族中的成員按其DEAD盒的不同又可分為三種不同的亞類，即DEAD盒蛋白、DEAH盒蛋白及DEXH盒蛋白[Angelika?Luking，Ulf?Stahl?et?al.，1998，Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.，33：259-296]。

研究發現，RNA解螺旋酶的不同的結構域在生物體內有著保守的功能。ATP酶結構域A為RNA解螺旋酶N末端的高度保守的結構域序列，其是RNA解螺旋酶與ATP結合的保守位點，是ATP結合所必需的；而ATP酶B結構域中保守的DEAD盒序列調節著ATP的水解與否。A結構域與B結構域在解螺旋酶中總是協同作用，ATP水解所釋放的能量是RNA解螺旋酶發揮生物學功能所必需的。SAT區域是RNA解螺旋酶的又一重要保守區域，該區域氨基酸的突變將一致RNA解螺旋酶的活性。該酶C末端的HRIGRXXR保守序列對于RNA的結合與ATP的水解也是必需的[Angelika?Luking，Ulf?Stahl?et?al.，1998，Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.，33：259-296]。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與人RNA解螺旋酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人RNA解螺旋酶12.54。

由于如上所述人RNA解螺旋酶12.54蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人RNA解螺旋酶12.54蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人RNA解螺旋酶12.54蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人RNA解螺旋酶12.54以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA解螺旋酶12.54的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA解螺旋酶12.54的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人RNA解螺旋酶12.54的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人RNA解螺旋酶12.54的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人RNA解螺旋酶12.54的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人RNA解螺旋酶12.54異常相關的疾病的方法。