[發(fā)明專利]一種新的多肽——人蛋白內(nèi)切酶9.35和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00127534.8
• 申請(qǐng)日: 2000-11-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1355313A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué);上海博道基因技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/50
• 分類號(hào): C12N9/50;C12N15/57;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/37;C12Q1/68;A61K38/48
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人蛋白內(nèi)切酶9.35，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白內(nèi)切酶Clp是一個(gè)蛋白二聚體，它包含一個(gè)水解蛋白的亞基(clpP)和兩個(gè)相關(guān)的ATP結(jié)合調(diào)控亞基(clpA和clpX)之一。ClpP是一個(gè)絲氨酸蛋白酶，具有與胰凝乳蛋白酶相似的活性。它的酶催化活性位點(diǎn)是絲氨酸-111和組氨酸-136，這兩個(gè)位點(diǎn)在不同來(lái)源的Clp酶中是高度保守的，可以用來(lái)鑒定某種蛋白是否屬于Clp蛋白。

其保守的堿基序列是：T-x(2)-[LIVMF]-G-x-A-[SAC]-S-[MSA]-[PAG]-[STA](其中S是酶催化活性位點(diǎn))和R-x(3)-[EAP]-x(3)-[LIVMFYT]-M-[LIVM]-H-Q-P(其中H是酶催化活性位點(diǎn))

Clp的活性與細(xì)胞的不同生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)。在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期早期，Clp的活性較低，然而隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)Clp的活性快速的增強(qiáng)，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期和進(jìn)入早期穩(wěn)定期的細(xì)胞中活性最高，然后又恢復(fù)最初的活性。這種活性的變化與Clp的Clp?A組份活性有關(guān)，而與Clp?P和Clp?X的活性關(guān)系不大。蛋白內(nèi)切酶Clp的功能是將蛋白切割成小的肽段，這一過(guò)程需要ATP與鎂離子的參與。在沒(méi)有ATP的情況下，只有短于5個(gè)殘基的寡聚肽段才會(huì)被切割。蛋白內(nèi)切酶Clp的另一個(gè)功能是充當(dāng)分子伴娘。它介導(dǎo)蛋白插入細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的過(guò)程、蛋白復(fù)合物的解聚或齊聚化的過(guò)程。蛋白內(nèi)切酶Clp還可以修復(fù)由于不良環(huán)境的壓力而被破壞的蛋白，以及活化Mu，λ以及P1?DNA復(fù)制所需的蛋白。這樣看來(lái)，蛋白內(nèi)切酶Clp不但可以水解蛋白，同時(shí)還在蛋白修復(fù)中起重要作用。如果此蛋白的活性失常將使細(xì)胞的蛋白修復(fù)功能受到影響。如果調(diào)控細(xì)胞周期的關(guān)鍵蛋白受到損傷而不能及時(shí)修復(fù)，那么細(xì)胞將有可能無(wú)限制的分裂增殖，最終導(dǎo)致癌癥。

Clp蛋白對(duì)細(xì)胞的蛋白質(zhì)平衡起重要的作用。蛋白水解酶的活性的降低會(huì)部分引起細(xì)胞中蛋白質(zhì)濃度的升高會(huì)改變細(xì)胞的滲透壓，引起細(xì)胞形狀的改變，在泌尿系統(tǒng)中則引起各種泌尿系統(tǒng)的疾病，例如蛋白尿，血尿，水腫，尿毒癥等。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人蛋白內(nèi)切酶的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人蛋白內(nèi)切酶9.35。

由于如上所述人蛋白內(nèi)切酶9.35蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人蛋白內(nèi)切酶9.35蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蛋白內(nèi)切酶9.35蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——人蛋白內(nèi)切酶9.35以及其片段、類似物和衍生物。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人蛋白內(nèi)切酶9.35的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人蛋白內(nèi)切酶9.35的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人蛋白內(nèi)切酶9.35的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽——人蛋白內(nèi)切酶9.35的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽——人蛋白內(nèi)切酶9.35的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人蛋白內(nèi)切酶9.35異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中1027-1284位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1677位的序列。