[發明專利]一種新的多肽——人酪氨酸酶46.64和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127519.4
• 申請日: 2000-11-24
• 公開（公告）號: CN1355300A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅;李瑤
• 申請（專利權）人: 復旦大學;上海博道基因技術有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/26;C12Q1/68;A61K38/44
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人酪氨酸酶46.64，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

酪氨酸酶是一種銅單體酶，催化單酚的羥基化和鄰二酚的氧化反應。酪氨酸酶在原核生物和真核生物中都有發現，和色素合成有關，如黑色素和其他一些多酚化合物。

酪氨酸酶結合兩個銅原子(CuA和CuB)，每個銅原子都和三個組氨酸殘基連接，這些組氨酸殘基附近的序列有相當的保守性，這樣的結構在血清素中也有發現。

酪氨酸酶及一些相關蛋白有兩個特征結構。第一個位于N末端，包含兩個結合銅原子的組氨酸殘基，其序列為H-X(4，5)-F-(LIVMFTP)-X-(FW)-H-R-X(2)-(LM)-X(3)-E；第二個位于整個酶的中心部位，包含一個結合銅原子的組氨酸殘基，其序列為D-P-X-F-(LIVMFYW)-X(2)-H-X(3)-D(所有的酪氨酸酶及血青素均含此序列)。

X-射線晶體衍射分析顯示，每個銅原子與兩個近赤道的組氨酸結合緊密，而與第三個軸向的組氨酸殘基結合相對較弱。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與酪氨酸酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人酪氨酸酶46.64。

由于如上所述人酪氨酸酶46.64蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人酪氨酸酶46.64蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人酪氨酸酶46.64蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人酪氨酸酶46.64以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人酪氨酸酶46.64的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人酪氨酸酶46.64的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人酪氨酸酶46.64的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人酪氨酸酶46.64的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人酪氨酸酶46.64的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人酪氨酸酶46.64異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中341-1615位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-2493位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。

本發明還涉及一種能與本發明多肽特異性結合的抗體。

本發明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人酪氨酸酶46.64蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發明的多肽。本發明還涉及用該方法獲得的化合物。

本發明還涉及一種體外檢測與人酪氨酸酶46.64蛋白異常表達相關的疾病或疾病易感性的方法，包括檢測生物樣品中所述多肽或其編碼多核苷酸序列中的突變，或者檢測生物樣品中本發明多肽的量或生物活性。

本發明也涉及一種藥物組合物，它含有本發明多肽或其模擬物、激活劑、拮抗劑或抑制劑以及藥學上可接受的載體。

本發明還涉及本發明的多肽和/或多核苷酸在制備用于治療癌癥、發育性疾病或免疫性疾病或其它由于人酪氨酸酶46.64表達異常所引起疾病的藥物的用途。